基于CRISPR/Cas9系统构建Slfn2基因敲除的小鼠肺癌细胞系

陈莹; 周祖平; 邢兵; 蒲仕明

doi:10.16088/j.issn.1001-6600.2021022302

广西师范大学学报（自然科学版） ›› 2022, Vol. 40 ›› Issue (04) : 173 -179. DOI: 10.16088/j.issn.1001-6600.2021022302

基于CRISPR/Cas9系统构建Slfn2基因敲除的小鼠肺癌细胞系

陈莹, 周祖平, 邢兵, 蒲仕明

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摘要

为构建Slfn2^-/-小鼠肺癌细胞系（Lewis lung carcinoma, LLC）,本文利用CRISPR/Cas9技术，在CHOPCHOP网站筛选Slfn2基因的sgRNA序列，将合成的oligo序列退火后连接至pLenti CRISPR v2质粒中，并与pMD2.G、psPAX2共转染至293T细胞中包装慢病毒；利用包装的慢病毒感染LLC细胞，经筛选和单克隆培养，获取Slfn2^-/-敲除的LLC细胞。结果显示：SgRNA成功插入载体重组质粒；利用3质粒包装的慢病毒成功将LLC中的Slfn2基因突变，获得丢失8个碱基移码突变和丢失180个碱基缺失突变的Slfn2^-/-小鼠肺癌细胞。可见，利用CRISPR/Cas9技术成功构建了Slfn2基因敲除的小鼠肺癌细胞。