中药化学成分抗糠秕马拉色菌活性筛选及协同抗菌作用

摘要

目的 从30种常见非挥发性中药化学成分中筛选出对糠秕马拉色菌（Malassezia furfur, MF）抑制活性最强的两种化学成分，并对两者的协同抗菌作用及作用机制进行探究。方法 采用管碟琼脂扩散法对30种中药单体化合物的MF抑制活性进行初筛；采用96孔板培养联合固体培养基接种法，测定活性最强两种单体化合物、酮康唑（KTZ）及吡啶硫酮锌（ZPT）的最低杀菌浓度（minimum bactericidal concentration, MBC）及其联合应用之后的联合最低杀菌浓度（combined minimum bactericidal concentration, CMBC）,并计算联合杀菌指数（fractional bactericidal concentration index, FBCI）;采用结晶紫法测定活性成分对MF生物膜的影响；扫描电镜观察活性成分对MF外观形态的影响；CCK-8法检测活性成分对人永生角质形成细胞（HaCaT）的细胞毒性。结果 对MF抑制活性最强的两种化学成分分别为肉桂酸（CIN）和盐酸小檗碱（BER）,在作用浓度为5.00 mg/mL时，两者抑菌圈直径分别为（15.17±2.37）mm和（11.21±1.03）mm。各样品的MBC大小顺序为：BER（2 500.00μg/mL）>CIN（156.25μg/mL）>ZPT（62.50μg/mL）>KTZ（7.81μg/mL）。FBCI试验结果表明：CIN和BER配伍，或者两者分别与KTZ或ZPT配伍，均具有协同杀菌的作用；CIN、BER、KTZ及ZPT相互配伍的CMBC分别为39.06、625.00、1.95、15.62μg/mL,FBCI均为0.5。各样品对MF生物膜抑制率的大小顺序为：CIN（93.08±1.15）%>KTZ（65.10±4.23）%>ZPT（43.00±2.81）%>BER（10.55±1.21）%。扫描电镜结果显示，CIN组MF细胞结构完整，但是大部分菌体细胞壁出现不同程度的凹陷；BER、KTZ及ZPT组MF细胞结构完整，但是大部分菌体整体皱缩，细胞壁表面凹凸不平、粗糙。各样品对HaCaT细胞毒性的大小顺序为：ZPT(IC₅₀<10.00μg/mL)>BER[IC₅₀=（27.83±0.66）μg/mL]>KTZ[IC₅₀=（28.22±0.14）μg/mL]>CIN(IC₅₀>200.00μg/mL)。结论 CIN和BER具有协同抗MF的作用，它们分别与ZPT或KTZ联合应用也有协同抗MF作用；CIN的抗菌作用机制可能与抑制生物膜相关；两者均具有应用于祛头皮屑外用药品或日化产品中的潜质。

关键词

糠秕马拉色菌 / 肉桂酸 / 盐酸小檗碱 / 协同抗菌作用 / 真菌生物膜

基金资助

广西中医药管理局科研课题(GXZYA20220102); 广西中医药大学科研课题(2021MS009)