不同状态下白念珠菌SAP2、MRR2与伊曲康唑耐药的关系

摘要

目的 初步明确在浮游状态和生物膜状态下白念珠菌毒力因子SAP2和转录因子MRR2对伊曲康唑(ITR)耐药的影响。方法 对10株伊曲康唑单耐菌株、10株氟康唑(FCA)/ITR/伏立康唑(VRC)全敏感菌株进行SAP2、MRR2基因测序，分析其基因突变对耐药的影响；通过倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察不同时段下白念珠菌生物膜的形成，并通过酶标仪测定其OD值判断生物膜形成能力与耐药的关系。RT-PCR分别对浮游状态及生物膜状态下临床分离白念珠菌进行SAP2及MRR2表达量的检测，研究二者表达水平与伊曲康唑耐药的关系，并对浮游及生物膜状态下MRR2Δ/Δ菌株SAP2表达量进行检测，进一步明确MRR2与SAP2的关系。结果 通过基因测序发现，SAP2基因无错义突变，MRR2基因测序出现12个错义突变位点；通过RT-PCR发现在不同状态下，耐药菌株组SAP2[浮游/生物膜：(1.30±0.39)/(4.29±1.76)]和MRR2[浮游/生物膜：(0.95±0.14)/(1.77±0.80)]基因的表达量均高于敏感菌株组[SAP2浮游/生物膜：(0.80±0.48)/(2.59±0.93);MRR2浮游/生物膜：(0.49±0.32)/(0.98±0.64),P<0.05],在生物膜状态下两基因的表达水平SAP2(3.44±1.63)和MRR2(1.19±0.99)相比浮游状态下[SAP2/MRR2:(1.05±0.50)/(0.81±0.62)]均上调(P<0.05),且在浮游状态下，两基因之间有正相关关系(r=0.66,P<0.05),在浮游及生物膜状态下MRR2Δ/Δ菌株SAP2的表达[浮游/生物膜：(0.80±0.06)/(2.15±0.23)]相对于标准菌株ATCC11006[浮游/生物膜：(1.14±0.07)/(2.90±0.10)]均明显下调(P<0.05);通过倒置显微镜及激光共聚焦显微镜观察生物膜形成过程发现，所有菌株均形成了菌丝及孢子相互交错的生物膜，并通过测定其OD值发现，耐药菌株组生物膜形成能力(0.24±0.02)明显高于敏感组(0.15±0.02,P<0.001),MRR2Δ/Δ菌株的生物膜形成能力(0.12±0.12)明显低于标准菌株组(0.16±0.00,P<0.001)。结论 伊曲康唑耐药可能与白念珠菌MRR2基因突变有关；在浮游状态和生物膜状态下SAP2和MRR2的高表达都可影响白念珠菌对伊曲康唑的耐药，MRR2高表达对SAP2可能存在正向调控关系，从而影响其耐药。

关键词

白念珠菌 / 耐药性 / 生物膜 / SAP2 / MRR2 / 伊曲康唑

基金资助

国家自然基金面上项目(82072262)