复方狼毒方通过干预HeLa细胞来源的外泌体恢复朗格汉斯细胞的免疫活性

摘要

目的 探讨复方狼毒方干预后HeLa细胞来源的外泌体(exosomes, exos)对朗格汉斯细胞(Langerhans cell, LC)成熟和功能的影响。方法 提取复方狼毒方干预组和对照组的HeLa细胞释放的外泌体，采用透射电镜(transmission electron microscope, TEM)、纳米粒子跟踪分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)对外泌体进行鉴定。在体外培养人外周血单个核细胞来源的LC并用流式细胞术检测LC的标志物CD1a、CD11c、MHCⅡ和CD326。使用复方狼毒方干预组和对照组的外泌体与LC共培养48 h,再采用流式细胞术检测LC成熟相关表面共刺激分子CD40、CD80和CD86的表达；使用细胞划痕实验测定LC的迁移能力。干预组和对照组LC分别与T细胞混合培养72 h,通过混合淋巴细胞反应评估T细胞的增殖能力；通过ELISA检测T细胞分泌的炎症因子。结果 透射电镜可以观察到，从HeLa细胞的上清液中收集到的外泌体表现为圆形或类圆形膜性囊泡样结构，符合外泌体的典型特征；粒径分析鉴定出外泌体粒径为100 nm左右。流式细胞术检测体外诱导的LC的标志物CD1a、CD11c、MHCⅡ和CD326高表达，人单个核细胞来源的LC诱导成功。与对照组相比，复方狼毒方干预HeLa细胞来源的外泌体与LC共培养后，LC成熟相关表面共刺激分子CD40、CD80和CD86表达上调；LC的迁移能力增强；同时LC可诱导T淋巴细胞增殖，并促进T淋巴细胞分泌IL-2、IFN-γ等炎症因子。结论 复方狼毒方干预后HeLa细胞来源的外泌体可使LC向成熟表型分化，迁移能力增强，并促进T细胞的增殖与T细胞炎症因子的分泌。

关键词

人乳头瘤病毒 / 复方狼毒方 / 外泌体 / 朗格汉斯细胞

基金资助

上海市自然科学基金面上项目(21ZR1464000)