转录因子SP1调控lncRNA NKILA对增生性瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

摘要

目的 探讨转录因子特异性蛋白1(specificity protein 1,SP1)在NF-κB相关性长链非编码RNA(NF-κB interacting long non-coding RNA,NKILA)影响增生性瘢痕成纤维细胞凋亡中的作用。方法 提取并培养增生性瘢痕组织及其瘢痕旁邻近的正常皮肤组织中人皮肤成纤维细胞作为实验细胞系，免疫荧光鉴定成纤维细胞；qRT-PCR检测人瘢痕旁正常皮肤组织来源的成纤维细胞(NSFBs)和增生性瘢痕组织来源的成纤维细胞(HSFBs)中NKILA mRNA的表达水平；构建NKILA的干扰片段，实验分组为：空白对照组、si-NC组、si-NKILA 1组、si-NKILA 2组、si-NKILA 3组，qRT-PCR检测si-NKILA干扰效率；Western blot检测空白对照组、si-NC组、si-NKILA组HSFBs中凋亡指标Bcl-2和Bax的表达水平，流式细胞术检测各组HSFBs凋亡率；构建SP1的干扰片段，实验分组为：空白对照组、si-NC组、si-SP1 1组、si-SP1 2组、si-SP1 3组，qRT-PCR检测si-SP1的干扰效率；qRT-PCR检测干扰转录因子SP1后HSFBs中NKILA mRNA的表达水平。结果 与NSFBs相比，NKILA在HSFBs中表达明显升高(P<0.001)。干扰NKILA表达后，Bax蛋白表达水平与Bcl-2蛋白表达水平比值显著增加(P<0.001),HSFBs凋亡率明显增加(P<0.001);干扰转录因子SP1表达后，HSFBs中NKILA的表达下降(P<0.01)。结论 lncRNA NKILA抑制增生性瘢痕成纤维细胞凋亡，且受转录因子SP1调控。

关键词

增生性瘢痕 / 成纤维细胞 / 长链非编码RNA / 凋亡 / 特异性蛋白1

基金资助

国家自然科学基金项目(82370293,U21A20343,82360628); 宁夏回族自治区重点研发计划重点项目(2023BEG02074,2022BFH02013,2022BEG02054,2021BEG02028); 宁夏医科大学校级科研项目重点项目(XZ2022005)