尼达尼布通过TGF-β1/Smad信号通路调控人瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的产生

摘要

目的 探讨尼达尼布对瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblasts, KFs)增殖、迁移、细胞外基质(ECM)相关蛋白表达以及TGF-β1/Smad通路的影响。方法 利用成品进行KFs培养。将KFs分为空白对照组、DMSO组、尼达尼布浓度组(分别为0.5、1、2、4和8μmol/L),每组培养24 h后，采用CCK-8实验检测KFs增殖情况。利用细胞划痕实验检测2μmol/L尼达尼布在不同时间段下(0、24、48 h)对KFs迁移能力的影响。根据CCK-8的结果将尼达尼布分为4组，依次为空白对照组，低、中、高浓度组(1、2、4μmol/L),通过Western blot实验分别检测CollagenⅠ、CollagenⅢ、纤连蛋白(FN)及相关蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达情况。而后再将其分为空白对照组、SB-431542(5μmol/L)干预组、尼达尼布(2μmol/L)干预组、SB-431542(5μmol/L)联合尼达尼布(2μmol/L)干预组，培养24 h。通过Western blot实验探索尼达尼布对TGF-β1/Smad信号通路蛋白的表达情况。结果 根据CCK-8实验法得出尼达尼布处理KFs 24 h后，随着浓度的增加，细胞存活率呈现下降趋势，在药物浓度为8μmol/L作用24 h后，抑制KFs效果最为显著。细胞划痕实验显示，与空白对照组相比，2μmol/L尼达尼布组KFs迁移能力受到显著抑制(P<0.01);Western blot显示尼达尼布可下调CollagenⅠ、CollagenⅢ、FN、α-SMA蛋白表达，并且可降低TGF-β1/Smad通路中Smad2及Smad3磷酸化蛋白表达。结论 尼达尼布可能通过TGF-β1/Smad信号通路，抑制KFs增殖、迁移及细胞外基质相关蛋白的表达。

关键词

瘢痕疙瘩 / 尼达尼布 / 成纤维细胞 / TGF-β1/Smad信号通路 / 细胞外基质相关蛋白

基金资助

国家自然科学基金项目(82260617); 吉林省教育厅科学研究项目(JJKH20240691KJ)