巨噬细胞介导miR-34a-5p纳米复合物递送对KSHV阳性细胞增殖和迁移能力的影响

摘要

目的 研究巨噬细胞介导miR-34a-5p纳米复合物递送对卡波西肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)阳性大鼠间充质前体干细胞(KMM细胞)的影响。方法 脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7,通过Real-time PCR检测白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)验证巨噬细胞炎症模型的构建。MTT实验检测纳米载体β-环糊精接聚乙烯亚胺(β-CD-PEI)和叶酸偶联β-环糊精接聚乙烯亚胺(β-CD-PEI-FA)在巨噬细胞中的细胞毒性。激光共聚焦实验检测巨噬细胞对miR-34a-5p纳米复合物的摄取。将载β-CD-PEI/miR-34a-5p和β-CD-PEI-FA/miR-34a-5p纳米复合物的巨噬细胞与KMM细胞进行成分可交换式共培养，Real-time PCR检测KSHV病毒基因复制与转录激活因子(RTA)、病毒G蛋白耦联受体(v-GPCR)和KSHV包膜糖蛋白编码基因(K8.1)的表达水平；MTT和平板克隆实验检测细胞增殖能力；细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移能力；Western blot实验检测细胞周期相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)的表达。结果 Real-time PCR结果显示巨噬细胞加入LPS组IL-6和TNF-α的表达水平较未加LPS组升高(P<0.05)。MTT实验显示纳米载体有较好的生物安全性。激光共聚焦实验显示巨噬细胞成功摄取miR-34a-5p的纳米复合物。巨噬细胞与KMM细胞共培养后，β-CD-PEI-FA/miR-34a-5p组中的KSHV病毒基因RTA、v-GPCR和K8.1的表达水平降低(P<0.05);β-CD-PEI-FA/miR-34a-5p组细胞的增殖、迁移能力及CDK4和CDK6的表达水平均低于对照组(P<0.05)。结论 巨噬细胞介导的miR-34a-5p纳米复合物能够抑制共培养的KMM细胞的增殖和迁移能力，并降低细胞中KSHV病毒基因的表达。巨噬细胞介导的miR-34a-5p纳米复合物递送是抗KSHV治疗的新策略。

关键词

卡波西肉瘤相关疱疹病毒 / miR-34a-5p / 巨噬细胞 / 纳米复合物 / 递送 / 增殖 / 迁移

基金资助

国家自然科学基金项目(32460038); 兵团指导性科技计划项目(2024ZD022); 石河子大学交叉学科研究计划项目(JCYJ202318)