益艾康胶囊通过调控转录因子FOXP3对HIV-1辅助受体CCR5启动子的影响

摘要

目的 探讨益艾康胶囊通过调控转录因子FOXP3影响HIV-1辅助受体CCR5的作用机制。方法 CCK-8法筛选益艾康胶囊作用于人单核细胞白血病细胞(THP-1细胞)的合适浓度;RT-qPCR和Western blot法检测不同浓度益艾康胶囊含药血清作用后CCR5和FOXP3 mRNA和蛋白表达水平;采用生物信息学软件预测FOXP3与CCR5基因启动子区域潜在结合位点;双荧光素酶报告实验验证FOXP3与CCR5启动子结合位点。结果 益艾康胶囊含药血清在20%以下细胞活力无明显差异;益艾康胶囊含药血清能够下调CCR5和FOXP3基因和蛋白表达水平,并存在剂量依赖性;转录因子FOXP3在CCR5启动子区存在结合位点。野生型共转染(pFireRluc-Wt-CCR5+pcDNA3.1-FOXP3)组荧光素酶活性相对值较野生型单转染(pFireRluc-Wt-CCR5)组高约1倍,差异有统计学意义(P<0.01),比突变型共转染(pFireRluc-Mt-CCR5+pcDNA3.1-FOXP3)组高约3倍;在FOXP3过表达后,益艾康胶囊处理的野生型共转染(pFireRluc-Wt-CCR5+pcDNA3.1-FOXP3+YAK10%)组荧光素酶活性相对值明显高于益艾康胶囊处理的野生型单转染(pFireRluc-Wt-CCR5+YAK10%)组和野生型共转染(pFireRluc-Wt-CCR5+pcDNA3.1-FOXP3)组,差异有统计学意义(P<0.01),且益艾康胶囊处理的野生型(pFireRluc-Wt-CCR5+YAK10%)组相对值明显低于益艾康胶囊处理的突变型(pFireRluc-Mt-CCR5+YAK10%)组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 FOXP3能够与CCR5启动子结合并调控CCR5活性,益艾康胶囊可能通过作用于FOXP3与CCR5启动子的结合位点影响CCR5启动子活性。

关键词

益艾康胶囊 / 艾滋病 / CCR5 / 转录调控 / 双荧光素酶报告基因

基金资助

国家自然科学基金项目(81603607); 河南省科技攻关项目(232102521026,222102520025); 河南省自然基金项目(232300421184); 河南省教育厅重点科研项目(20A310008)