去衣原体质粒蛋白Pgp4阻断毒力因子Pgp3分泌的实验观察

摘要

目的 通过构建高表达Pgp3而不表达Pgp4的新突变衣原体，研究Pgp3的分泌是否受到Pgp4的调控。方法 以质粒pGFP::CM为模板通过聚合酶链反应(PCR)和In-Fusion克隆技术依次构建质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4。经过PCR、酶切和测序鉴定正确的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4转化至无质粒的鼠衣原体株CMUT3中，荧光显微镜下观察并挑选带有荧光的鼠衣原体包涵体，经过氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑纯化后，间接免疫荧光染色对新的鼠衣原体株进行鉴定。结果 经PCR、酶切和测序鉴定后得到正确序列的重组质粒pGFP::CM BFP R Pgp3和pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,转化CMUT3后可见含有绿色荧光的衣原体包涵体，氨苄青霉素药物筛选和噬菌斑实验纯化后，得到新的鼠衣原体株CMUT3-pGFP::CM BFP R Pgp3&Pgp3 R Pgp4,免疫荧光证实Pgp3蛋白在新衣原体中的表达量高于CMUT3-pGFP::CM,但是Pgp3蛋白只存在于衣原体包涵体中，并没有分泌到宿主细胞的胞浆中。结论 衣原体分泌蛋白Pgp3的分泌受到质粒蛋白Pgp4的调控，本研究为进一步理解衣原体的生物学性状提供新的线索。

关键词

鼠衣原体 / Pgp3 / Pgp4 / 分泌机制 / 衣原体转化

基金资助

国家自然科学基金资助项目(32470204); 天津市医学重点学科建设资助(TJYXZDXK-3-010C)