蜈蚣败毒饮调控组织驻留记忆T细胞相关自噬通路Rheb/mTOR影响银屑病复发的机制

摘要

目的 探索中药制剂蜈蚣败毒饮通过干预自噬相关途径脑Ras同源蛋白（ras homolog enriched in brain, Rheb）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin, mTOR）进而影响皮肤组织中组织驻留记忆T细胞(tissue-resident memory T cells, T_RM)的表达和分泌来改善银屑病复发的机制。方法 采用咪喹莫特二次诱导法制备30只复发型银屑病小鼠模型，将其分为6组，每组5只，分别为空白组、模型组、甲氨蝶呤组(3.6×10^-4g/kg)及蜈蚣败毒饮低、中、高剂量组（7.93、15.85、31.7 g/kg）。记录造模过程中小鼠皮损变化，并观测灌胃后鼠银屑病面积和严重程度指数（mice psoriasis area and severity index, MPASI）评分；采用马松三色染色（masson staining, Masson）和天狼星红染色法观察小鼠皮损真皮层中胶原纤维的状态；采用蛋白印迹（western blot, WB）实验及免疫组织化学染色检测小鼠皮损组织中Rheb、mTOR蛋白及磷酸化（phosphorylated, p）-Rheb、p-mTOR蛋白的表达及分布情况；采用流式细胞术检测小鼠皮损组织中T_RM细胞的表达情况；采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）检测小鼠血清中T_RM细胞主要分泌因子白细胞介素（interleukin, IL）-17、IL-22、干扰素-γ（interferon-γ, IFN-γ）的含量。结果 咪喹莫特二次诱导时银屑病样皮损出现时间显著早于一次诱导（2 d<4 d）,且复发型银屑病模型的皮损表现更为严重。与空白组比较，模型组的MPASI分值明显增高[（26.40±2.55）分vs.（0.00±0.00）分],皮损组织中大量胶原纤维溶解，肌纤维排列混乱，炎细胞浸润明显，其皮损中的p-Rheb、Rheb、p-mTOR、mTOR蛋白均受到不同程度的抑制，自噬反应的发生导致皮损中T_RM细胞表达呈现活跃状态[（392.60±35.62）个vs.（25.40±3.56）个],分泌大量的IL-17[（493.27±35.53） pg/mL]、IL-22[（407.87±24.53） pg/mL]、IFN-γ[（242.38±13.29） pg/mL]导致银屑病复发且皮损加重。与模型组比较，蜈蚣败毒饮低、中、高各剂量组均可以显著降低皮损的MPASI分值[（12.40±1.23）分、（9.20±1.37）分、（5.20±0.44）分vs.（22.60±1.59）分，P<0.01],蜈蚣败毒饮中、高剂量组可以显著促进真皮组织内胶原纤维的合成，调控胶原纤维和肌纤维排列，抑制炎细胞浸润，并能够显著解除皮损中p-Rheb、p-mTOR蛋白的抑制状态（P<0.01）,从而抑制自噬反应的发生，并进一步降低皮损中T_RM细胞的表达[（168.40±20.21）个、（156.20±16.46）个]和炎症因子IL-17[（295.58±27.62）pg/mL、（276.36±22.47） pg/mL]、IL-22[（191.07±20.33） pg/mL、（187.66±18.25） pg/mL]、IFN-γ[（124.49±10.07） pg/mL、（120.42±9.53） pg/mL]的分泌（P<0.01）。结论 蜈蚣败毒饮可能通过调控Rheb/mTOR途径，抑制自噬反应的发生，从而阻断了自噬反应对于T_RM的能量供给，通过影响T_RM细胞的活性而降低银屑病的复发。

关键词

银屑病 / 蜈蚣败毒饮 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR) / 脑Ras同源蛋白(Rheb) / 组织驻留记忆T细胞 / 复发 / 自噬

基金资助

国家自然科学基金项目(82474505); 黑龙江中医药大学大学生科技创新项目(KY2024-03)