一株广谱抗菌Streptomyces Yangpuensis I5-5的筛选及全基因组测序分析

Screening and Whole-Genome Sequencing Analysis of a Broad-Spectrum Antimicrobial Streptomyces Yangpuensis I5-5

摘要

链霉菌属在抗生素和生物活性代谢产物的研究中占据重要地位，但传统筛选方法限制了新型抗菌物质的发现.为了拓展抗菌活性物质生产菌的来源，从四川省166个采样点收集土样，分离出4 994株放线菌并进行抑菌活性筛选，最终筛选出12株具有显著抑菌作用的菌株.16S rRNA测序结果表明，这些菌株均属于链霉菌属，其中I5-5与Streptomyces yangpuensis亲缘关系最为接近.I5-5对5株植物病原真菌和4株细菌具有较强的抑制效果.全基因组测序和基因功能分析揭示，I5-5基因组包含多个与抗菌相关的次级代谢物基因簇，如cosmomycin C和烷基间苯二酚等.这些研究为新型抗生素的开发和生物防治剂的应用提供了重要的基础.

Abstract

The genus Streptomyces plays a crucial role in the research of antibiotics and bioactive metabolites. However， traditional screening methods have limited the discovery of new antimicrobial substances. To broaden the sources of microorganisms that produce antimicrobial compounds， this study collected soil samples from 166 sites in Sichuan Province， isolated 4 994 actinomycetes and screened them for antibacterial activity. Ultimately， 12 strains with significant inhibitory effects were selected. 16S rRNA sequencing revealed that these strains all belonged to the genus Streptomyces， with strain I5-5 being most closely related to Streptomyces yangpuensis. Strain I5-5 exhibited potent inhibitory effects against five plant-pathogenic fungi and four bacterial species. Whole genome sequencing and gene function analysis further revealed that the genome of I5-5 multiple secondary metabolite gene clusters in I5-5 harbors associated with antimicrobial compounds， including cosmomycin C and alkylresorcinols. These findings lay a crucial foundation for the development of new antibiotics and biocontrol agents， and provide significant support in addressing antibiotic resistance and advancing the discovery of novel antimicrobial drugs.

Graphical abstract

关键词

放线菌的筛选 / Streptomyces yangpuensis / 抗菌活性 / 全基因组分析

Key words

screening of actinobacteria / Streptomyces yangpuensis / antimicrobial activity / whole-genome analysis

链霉菌属是已知抗生素和其他生物活性次级代谢产物的主要生产者，在医药开发和生物防治中具有重要价值^［1］.其次级代谢产物种类丰富、结构复杂，包括Ⅰ型聚酮类（如大环内酯类、多烯类、聚醚类和安莎类）、Ⅱ型聚酮类（如蒽环类、四环素类和金霉酸类）、Ⅲ型聚酮类（如查尔酮类）、非核糖体肽类（如多肽类和糖肽类）、核糖体肽类（如lanthipeptide、硫肽类）以及C₇N氨基环醇类、聚酮聚肽杂合类和寡糖磷脂类等^［2］.这些化合物具有抗感染、抗肿瘤、抗氧化和酶抑制等显著活性，已成为创新药物开发的重要资源.例如，蒽环类抗生素cosmomycin C被用于抗肿瘤药物，而氨基糖苷类抗生素istamycin主要在兽医领域用来治疗细菌感染^［3］.

随着耐药性病原菌的不断涌现，开发新型抗生素刻不容缓，而挖掘尚未被充分利用的微生物资源则是实现这一目标的有效途径.2016年，杨浦链霉菌（Streptomyces yangpuensis）被正式命名，其代谢产物研究在发现新型抗生素及其他具有潜在药用价值的化合物方面具有重要意义.此外，该菌还能够产生IAA和ACC脱氨酶，展现出促进植物生长和改善土壤环境的潜力.然而，这些应用领域的相关研究仍需进一步深入探索^［4］.

全基因组学作为一种高通量测序技术，为次级代谢产物及其基因簇的预测提供了有效工具^［5］.本研究以杨浦链霉菌为研究对象，通过全基因组学手段解析其代谢潜能，为后续次级代谢产物的分离与功能研究提供了重要方向.

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试土样

从四川阿坝、凉山、乐山、达州、宜宾、资阳等各地市州的农田、林地等采集土样.

1.1.2 主要培养基

改良高氏一号培养基^［6］：可溶性淀粉质量浓度20 g/L、NaCl 0.5 g/L、KNO₃ 1 g/L、K₂HPO₄·3H₂O 0.5 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01 g/L，固体培养基添加琼脂20 g/L.

分离培养基：可溶性淀粉质量浓度20 g/L、K₂HPO₄·3H₂O 0.5 g/L、MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L、KNO₃ 1 g/L、NaCl 0.5 g/L、FeSO₄·7H₂O 0.01 g/L，重铬酸钾50 mg/L，琼脂18 g/L，土壤水体积浓度100 mL/L.土壤水以10%的体积浓度煮沸后6 000 r/min离心5 min，取上清液.

发酵培养基：可溶性淀粉质量浓度10 g/L、葡萄糖30 g/L、黄豆饼粉15 g/L、蛋白胨5 g/L、酵母提取物5 g/L、NaCl 2 g/L、CaCO₃ 5 g/L.

生物鉴别培养基：以YEPD培养基为下层培养基，以含质量浓度10 g/L琼脂的YEPD培养基为上层培养基，刮取新鲜的白色念珠菌，用无菌水适当稀释，与融化的上层培养基混合，倒于凝固的下层培养基上，冷却后待用.

1.1.3 拮抗实验菌株

立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）、玉蜀黍赤霉菌［Gibberella zeae （Schwein.） Petch］、苹果轮纹病菌（Physalospora piricola Nose）、枇杷炭疽病菌（Colletotrichum acutatum）、白色念珠菌（Candida albicans）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、耻垢分枝杆菌（Mycobacterium smegmatis）、大肠埃希菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）由实验室保藏.

1.2 链霉菌的分离鉴定

1.2.1 链霉菌分离

预处理：铲去采样地点表层10 cm土壤，挖取10~20 cm植物根际土壤，装入灭菌处理过的密实袋里封好，带回实验室，将土样置于通风处自然风干两周及以上，研磨后过60目筛.

土壤放线菌的分离：称取上述土样5 g，置于装有45 mL无菌水的三角瓶中，加入灭菌的玻璃珠，振荡10 min，使土样分散均匀.取土样悬浊液适当稀释，涂布于分离培养基的平板，每个稀释梯度涂布3个平板，28 ℃培养5 d^［7］.

具抗菌活性放线菌的初筛：用无菌竹签挑取生长良好的单菌落点种在新制备的生物鉴别培养基上，28 ℃培养过夜，观察抑菌圈.将抑菌圈>5 mm的菌株接种在斜面上保藏并编号.

复筛：将分离菌株转接到液体发酵培养基中，28 ℃ 220 r/min发酵96 h.10 000 r/min，离心3 min，取其上清液用细菌滤膜过滤，将过滤液加入生物鉴别培养基中，通过打孔法观察抑菌圈形成情况，测量抑菌圈的直径，保留抑菌圈>8 mm的菌株，并记录编号.

发酵产物的初步分析：将发酵液离心的菌体用等体积的甲醇溶解后破壁处理30 min，离心得到上清液，同样在生物鉴别培养基上用打孔法观察抑菌圈，测量抑菌圈的直径，保留抑菌圈>10 mm的菌株.将发酵上清液和甲醇提取上清液分别在200~750 nm之间进行全波长扫描，得到全波长扫描图，选取单一峰值较高的菌株.

1.2.2 16S rDNA序列测定和系统发育分析

将筛选获得的菌株用改良高氏一号液体培养基在28 ℃，220 r/min液体培养3 d，按照试剂盒提取放线菌的DNA，采用16S rRNA的通用引物27F：5’- TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3’/1492R：5’-AG AGTTTGATCMTGGCTCAG-3’扩增16S rDNA序列^［8］，之后用rpo B的引物序列rpoF： 5’-GAGCGCA TGACCACCCAGGACGTCGAGGC-3’；rpoR： 5’-CCT CGTAGTTGTGACCCTCCCACGGCATG-3’扩增rpo B编码基因，送北京擎科生物科技股份有限公司测序.用MEGA64进行进化树的绘制.

1.3 拮抗性实验

用PDA培养基活化待测植物致病真菌菌株，采用平板对峙培养法分析抑菌能力^［9］.白色念珠菌、酵母菌用培养基YEPD活化，用LB活化枯草芽孢杆菌、耻垢分枝杆菌、大肠埃希菌，用质量分数7.5%氯化钠肉汤活化金黄色葡萄球菌，采用牛津杯法观察48 h的抑菌结果.

1.4 菌株形态鉴定与生理生化鉴定

将待测菌株接种在改良高氏一号固体培养基培养4 d，观察菌落形态，制备样品电镜观察.参照《伯杰氏细菌鉴定手册》对菌株I5-5进行生理生化鉴定^［10］.

1.5 菌株I5-5基因组测序及注释

用试剂盒提取菌株I5-5的DNA，通过Nanodrop（ND-1000）分光光度计和凝胶电泳评估DNA质量.样品送上海美吉生物医药科技有限公司完成全基因组测序.构建I5-5 DNA文库用于二代测序Illumina测序和三代测序Nanopore.使用Fastp v0.23.0软件对Illumina测序产生的原始数据进行质量控制和剪切，使用Unicycler v0.4.8对经过质控的Illumina数据和Nanopore数据进行混合组装，并借助Pilon v1.22和SOAPdenovo 2.04软件对组装结果进行进一步序列优化和校正，得到最终的组装基因组.利用Prodigal软件预测I5-5染色体基因组，使用GeneMarkS软件预测I5-5质粒基因组.经过预测分析，获得功能基因的核酸序列和其对应功能蛋白的氨基酸序列^［11］.

通过CG View软件，初步绘制I5-5基因组圈图，全面展示I5-5基因组的特征，包括正义链和负义链上的基因、COG功能分类情况、GC含量以及基因组大小等信息.通过Antismash（https：//antismash.secondarymetabolites.org/）软件对样本的次级代谢产物合成基因簇进行预测^［12］.

1.6 数据处理

采用Excel 2021、GraphPad Prism 8、SPSS 26、MEGA64、Adobe Illustrator 2024等软件分析和处理数据.

2 结果与分析

2.1 拮抗放线菌的初步筛选结果

从四川省各地市州共采集土样166个，梯度稀释后涂布于含有不同浓度重铬酸钾的高氏一号培养基上，待长出菌落后，共挑取4 994株放线菌，连同琼脂块放置于含有白色念珠菌的生物检测平板上，检测抑菌活性，依据抑菌圈的大小和菌落颜色的不同，能产生抑菌圈的菌株共计852，筛选出312株进行液体发酵，对其发酵液的抑菌活性进行检测，其中有97株菌的发酵液具有较强的抑菌活性，根据发酵液抑菌圈的大小及其粗提物的全波长扫描出现的峰值，选出12株菌株进行后续实验.

2.2 菌株16S rRNA测序比对结果

通过菌落形态观察和镜检，初步判定所挑取菌株均为放线菌， 16S rDNA序列比对结果显示它们均属于链霉菌属（图1）.其中I5-5与S. flavotricini、S. spororaveus、S. xanthophaeus等多种链霉菌的相似性均为100%，需进一步分析以确定其种的分类地位.I5-1与S. rhizosphaericus亲缘关系最近，相似值为98.35%； I12-1与S. coffeae亲缘关系最近，相似值为97.65%；I22-6与S. colombiensis亲缘关系最近，相似值为97.73%；I22-7与S. virginiae亲缘关系最近，相似值为97.34%；I25-1与S. ossamyceticus亲缘关系最近，相似值为99.18%；I35-5与S. malaysiensis亲缘关系最近，相似值为99.78%；I51-5与S. antimycoticus亲缘关系最近，相似值为99.72%； I62-2与S. globosus亲缘关系最近，相似值为98.68%；I64-1与S. nojiriensis亲缘关系最近，相似值为99.98%；I113-3与S. yangpuensis亲缘关系最近，相似值为99.93%，I136-4与S. avidinii亲缘关系最近，相似值为99.56%.

2.3 对病原菌的抑菌活性分析

采用平板对峙培养法分析了12株放线菌对5株典型的植物致病菌和4株细菌的抑菌能力（表1），多种菌对立枯丝核菌、玉蜀黍赤霉菌、苹果轮纹病菌、枇杷炭疽病菌和白色念珠菌等多种真菌有抑菌活性.其中I5-5对尖孢镰刀菌的抑制能力最强，抑菌圈为4.80 cm，抑制率为80.32%.对革兰氏阳性和阴性菌均有较强的抑制能力，但对革兰氏阳性菌的抑制能力更强，其中对耻垢分枝杆菌的抑制能力最强，抑菌圈直径为4.00 cm，抑制率为68.78%.I62-2对立枯丝核菌没有抑制作用，但对玉蜀黍赤霉菌的抑制能力最强，抑菌圈为4.00 cm，抑制率为68.78%，对耻垢分枝杆菌、尖孢镰刀菌和枇杷炭疽病菌，其抑菌圈分别为3.50、3.20、3.20 cm，抑制率均大于55%.I64-1对立枯丝核菌没有抑制作用，对枇杷炭疽病菌的抑制能力最强，为3.20 cm，抑菌率为53.32%；对枯草芽孢杆菌抑菌圈为1.95 cm，抑制率为32.5%.I22-6对立枯丝核菌和苹果轮纹病菌没有抑制作用，对玉蜀黍赤霉菌的抑制能力最强，抑菌圈为2.90 cm，抑制率为48.33%.I113-3对枇杷炭疽病菌和耻垢分枝杆菌没有抑制作用，对立枯丝核菌和金黄色葡萄球菌的抑制能力较强，抑菌圈分别为3.70 cm和3.35 cm，抑制率为61.67%和58.33%.I136-4对立枯丝核菌、苹果轮纹病菌和耻垢分枝杆菌没有抑制作用.供试真菌中，该菌株对玉蜀黍赤霉菌、尖孢镰刀菌和枇杷炭疽病菌的抑制能力最强，其抑菌圈分别为3.90、3.30、3.20 cm，其抑制率分别为66.63%、55.38%、53.35%.综合其抑菌的广谱性和抑菌强度以及菌种的新颖性，筛选出I5-5、I22-7、I64-1、I136-4做进一步研究.

2.4 I5-5分类鉴定

在改良高氏一号固体培养基上，I5-5单个菌落近乎圆形（图2），略凸，干燥，有白色气生菌丝和淡黄色基部菌丝体，孢子为浅紫灰色.气生菌丝直立，孢子短杆状，长约1 μm.根据16S rRNA和rpo B的测序结果绘制进化树（图3）可知，I5-5与S. yangpuensis的亲缘关系最近，相似度为99.89%.由生理生化鉴定结果可知（表2），与模式菌株的鉴定结果相比，除蔗糖利用和酪氨酸利用之外，其余完全相同^［13］.

2.5 菌株I5-5基因组特征

本研究利用Illumina 平台测序和Nanopore 平台三代测序技术对I5-5基因组测序，对所测序的结果进行统计与质控，其中 Illumina测序的结果是原始reads读长为151 bp，原始序列数据双端reads的条数为8 043 724，原始数据的总碱基数为1 214 602 324 bp，质控后双端reads的条数为7 254 228，质控后的总碱基数1 085 420 878 bp，Q20碱基占比为97.84%，Q30碱基占比达93.79%（注：Q20、Q30是高通量测序常用质控指标，分别对应测序质量值≥20，表示碱基识别准确率≥99%；≥30表示碱基识别准确率≥99.9%）；Nanopore测序为reads条数49 552，总碱基数317 338 944 bp，平均reads读长6 404 bp，组装后序列大小为 7 879 870 bp，Q20为97.83%，Q30为93.79%.测序结果表明，I5-5含1条长度为7 729 751 bp的染色体和1条长度为150 119 bp的质粒，基因组的（G+C）%含量为72.28%，共编码基因7 120个；所有编码基因总长度为6 905 727 bp，编码基因平均长度为 872 bp，含有tRNA基因70个，rRNA基因21个，16S rRNA基因7个，23S rRNA基因7个，5S rRNA基因7个，含有串联重复序列892个，总长度为114 951 bp.含有12个基因岛，2个前噬菌体，28个 CRISPR-Cas 可移动元件，63个转座子.将预测结果，使用Circos软件分析，获得全基因组图谱（图4）.

当微生物的生长到达一定的生长时期，就会利用初级代谢产物作为前体，经过一系列聚合、装配等代谢过程，合成一些对自身生命活动没有明确功能的物质，即次级代谢产物.次级代谢产物一般由多基因控制，其编码基因通常在基因组中成簇存在，编码具有多种功能的复合酶，这些基因簇构成次级代谢产物的合成基因簇.利用Antismash软件对菌株I5-5基因组进行次级代谢产物进行分析（表3），预测得到23个次级代谢产物基因簇，与已被鉴定的生物合成基因簇相比其中12类具有抗菌活性的物质：cosmomycin C、烷基间苯二酚（alkylresorcinol）、istamycin、monensin、ebelactone、streptothricin、divergolide A / divergolide B / divergolide C / divergolide D、hopene、toxoflavin / fervenulin、neocarzinostatin、spore pigment、carotenoid，说明在次级代谢产物中主要含非核糖体途径合成的脂肽类抗生素和聚酮类抗生素.其中烷基间苯二酚（alkylresorcinol）的合成基因簇与已知的次级代谢产物合成基因簇的相似度为100%，其余的cosmomycin C、istamycin、monensin、ebelactone、neocarzinostatin等的相似度低于10%，说明可能形成新的抑菌物质，其中还有5个基因簇未预测出次级代谢物，说明该菌具有发现新抑菌物质的潜力.

3 讨论

放线菌是极具应用价值的植物病害生防微生物资源，链霉菌属及其近缘类群为该类资源中应用最广泛的类群.在放线菌筛选工作的广泛开展过程中，通常使用传统的菌种分离和鉴定方法，导致大量已知的普通分离菌株被重复分离，因此，从一般生境中获取放线菌新物种或新活性物质的几率越来越小.本研究在四川省各地市州共设置166个采样点，利用选择性培养基结合重铬酸钾进行协同筛选.初筛阶段共分离获得4 994株放线菌，且平板上未见霉菌与细菌污染，表明该分离体系对放线菌具有良好的选择性，为后续构建放线菌资源库奠定了坚实基础；在抑菌活性放线菌的初筛过程中，将菌落连同其所附琼脂块直接挑取，转接于生物鉴别培养基，观察其抑菌性能，即可筛选获得抑制白色念珠菌的放线菌，与琼脂块培养法相比，操作既简便又节约时间，减少筛选工作量^［14］；大多数念珠菌对常用新型抗真菌药物的体外敏感性很高，光滑念珠菌和热带念珠菌对氟康唑和棘白菌素类药物的耐药率有所增加^［15］，本研究以白色念珠菌为拮抗菌，以期筛选出稀有的抗菌活性物质.在复筛和发酵产物的初步检测过程中，分析了312株菌株的液体发酵，验证其抑菌性，并将其全波长扫描的吸收峰值与已知次生代谢产物的吸收峰进行对比，筛选获得抑菌作用强、具有应用前景的菌株.

我们分离到多株具有广谱的较强抑菌活性的放线菌，对其中抑菌活性最强的12株菌进行抑菌谱研究，其中I5-5对6种真菌和4种细菌都有抑菌活性，经过16S rRNA和管家基因rpo B的序列分析，初步确定其与S. yangpuensis亲缘关系最近，经过生理生化鉴定和全基因组的鉴定进一步确定了其种的分类地位.2019年在上海的百合根际发现菌株S. yangpuensis CM253，该菌株具有尖孢镰刀菌抑制活性，可作为生物防治剂进行开发利用；但有关S. yangpuensis的抑菌机制和抑菌活性物质并未被阐明.I22-7对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌等革兰氏阳性菌具有较高的抑菌活性，由16S rRNA序列比对结果可知与S. virginiae亲缘关系最近，Virginiamycin M1是S. virginiae产生的一种大环内酯类抗生素，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度MIC为0.25 μg/mL^［16］.I64-1对枇杷炭疽病菌的抑制率高达53.32%，通过16S rRNA序列分析其与S. nojiriensis亲缘关系最近，已有报道S. nojiriensis产生抑制α-葡糖苷酶的野尻霉素^［17］，本研究在后续实验过程中也经过实验证明I64-1对α-葡糖苷酶的抑制率高达87.69%，值得进一步深入研究.

全基因组学技术在放线菌研究中的应用，尤其是在代谢通路解析和次级代谢物预测方面，大大提升了挖掘具有抑菌活性产物的效率与便利性.为此，本研究对菌株I5-5进行了全基因组测序分析.次级代谢物的预测分析表明，该菌具有cosmomycin C、烷基间苯二酚（alkylresorcinol）、istamycin、monensin、ebelactone、streptothricin、divergolide A/divergolide B/divergolide C/divergolide D、hopene、toxoflavin/fervenulin、neocarzinostatin、spore pigment、carotenoid等活性物质合成基因簇.有研究表明S.cosmosus、S.olindensis^［18］和S.antibioticus等菌株能产生cosmomycin类抗生素，被广泛应用于肿瘤治疗.最新研究表明cosmomycin C在乳腺癌细胞中，通过抑制STAT3通路来发挥抗肿瘤作用^［19］.Azotobacter vinelandii、S. griseus和Neurospora crassa等能产生Alkylresorcinols烷基间苯二酚^［20］.通过型III多酮合酶（PKS）相关的途径合成该物质，烷基间苯二酚具有抑制癌细胞生长、抗真菌、抗炎、抗菌、抗寄生虫、抗氧化和遗传毒性活性^［21］.Monensin是一种聚醚类抗生素^［22］，具有破坏高尔基体、抑制细胞内蛋白转运的作用，并且具有抗菌、抗疟等抗微生物活性^［23］.Istamycin（ISM）是由S. tenjimariensis^［24］产生的含2-脱氧fortamine的氨基糖苷类抗生素（AGA），对大多数临床相关病原体具有广谱杀菌活性.Ebelactones是由放线菌S. aburaviensis产生的，能抑制cutinase，显示出对植物保护作用，能够阻止Erysiphe graminis的侵害，具有广泛的生防潜力，值得深入研究^［25］.Streptothricin最初在S. lavendulae^［26］中被发现，具有抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的活性^［27］.

4 结论

本研究通过简化筛选方法，从四川多地采样并成功分离到多个具有抑菌活性的放线菌.对菌株I5-5进行全基因组测序分析，发现其含有丰富的代谢基因簇，涉及cosmomycin C、alkylresorcinol、monensin等多种具有抗菌、抗癌及其他生物活性的物质.这些次生代谢物已在抗肿瘤、抗菌药物研发及生物防治领域展现潜力，为深入研究提供了重要依据，并拓展了放线菌资源的应用前景^［28］.

参考文献

[1] 董雷，韩嘉瑞，李帅，等. 链霉菌最新研究进展［J］. 微生物学报，2023，63（5）：1815-1832.

[2] 张瑞，金文铮，陈依军. 细菌聚酮合酶间的杂合方式及聚酮化合物生物合成逻辑［J］. 合成生物学，2024，5（3）：548-560.

[3] 王聪，王坤，姜明国，等. 广西北部湾放线菌的分离筛选及活性产物的鉴定［J］. 天然产物研究与开发，2019，31（7）：1170-1176.

[4] 张涵，习慧君，赵玉华，等. 杨浦链霉菌WLU210的筛选、鉴定及其对苦瓜枯萎病的生防作用研究［J］. 中国生物防治学报，2021，37（5）：1058-1065.

[5] 安妮，徐瑞阳，吴锡，等. 一株秸秆促腐枯草芽孢杆菌的筛选鉴定及全基因组分析［J］. 微生物学通报，2024，51（8）：1-14.

[6] 钱嘉兴，祝诗怡，钱生辉，等. 海洋放线菌HN1-131鉴定及其抗菌活性产物分析［J］. 生物学杂志，2024，42（1）：41-47.

[7] 程康，何勇，李迪，等. 烟草疫霉生防放线菌的分离鉴定、功能探究及培养条件优化［J］. 微生物学通报，2024，51（10）：1-20.

[8] 陈乙煌，吴一铮，冉松，等. 胡杨根际土壤来源放线菌分离及其拮抗活性筛选［J］. 生物资源，2024，46（3）：231-237.

[9] 戚华铃，陈盈营，周艳，等. 密旋链霉菌Act12对柑橘采后酸腐病及果实品质的影响［J］. 农业生物技术学报，2024，32（11）：2640-2648.

[10] Gibbons R. Bergey’s manual of determinative bacteriology［M］. Baltimore： The Williams & Wilkins Company，1984.

[11] 蔡益航，刘小英，刘国强. 不同施肥方式对枇杷园土壤微生物群落结构的影响［J］. 贵州农业科学，2024，52（10）：69-79.

[12] 孙志阳. 海洋鼠灰链霉菌HN43抗禾谷镰刀菌的研究及其生防制剂制备［D］. 曲阜：曲阜师范大学，2024.

[13] Li T， Hu S， Wang X， et al. Antagonism of rhizosphere streptomyces yangpuensis CM253 against the pathogenic fungi causing corm rot in saffron （Crocus sativus L.）［J］. Pathogens，2022，11（10）：1195.

[14] 邬建国，王敏，杨东靖，等. 高产纳他霉素的褐黄孢链霉菌选育［J］. 中国抗生素杂志，2004，29（6）：332-334.

[15] 朱利平，管向东，黄晓军，等. 中国成人念珠菌病诊断与治疗专家共识［J］. 中国医学前沿杂志，2020，12（1）：35-50.

[16] Francisco H C J， Fernando R C J， Abraham D Q C， et al. Development of a simple and sensitive method for the determination of virginiamycin M1 antibiotic by capillary electrophoresis［J］. Chemical Papers，2022，76（12）：7419-7427.

[17] 任向东，丁振江，黄京美，等. 桑叶中1-脱氧野尻霉素的提取纯化工艺及降血糖作用研究进展［J］. 农产品加工， 2024（19）：67-73.

[18] Roger C A， Leandro G， Brandan P， et al. Mycothiol peroxidase activity as a part of the self-resistance mechanisms against the antitumor antibiotic cosmomycin D［J］. Microbiology Spectrum，2022，10（3）：e0049322.

[19] Kim J， Lee Y J， Shin D S， et al. Cosmomycin C inhibits signal transducer and activator of transcription 3 （STAT3） pathways in MDA-MB-468 breast cancer cell［J］. Bioorganic & Medicinal Chemistry，2011，19（24）：7582-7589.

[20] Scott B， Joachim S， Daniel C， et al. Alkylresorcinol biosynthesis in plants： new insights from an ancient enzyme family？［J］. Plant Signaling & Behavior，2010，5（10）：1286-1289.

[21] Anastasia Z， Olga S， Anastasia S， et al. An overview of alkylresorcinols biological properties and effects［J］. Journal of Nutrition and Metabolism，2022，10（2）：4667607.

[22] Qian W， Ning L， Yaming D， et al. Triepoxide formation by a flavin-dependent monooxygenase in monensin biosynthesis［J］. Nature Communications，2023，14（1）：6273.

[23] Marianthi V， Elin A， Rabelo M F， et al. Monensin induces secretory granule-mediated cell death in eosinophils［J］. The Journal of Allergy and Clinical Immunology，2023，152（5）：1312-1320.

[24] Slattery Y， Rajbhandar I， Wesson K. Competition-mediated antibiotic induction in the marine bacterium Streptomyces tenjimariensis ［J］. Microbial Ecology，2001，41（2）：90-96.

[25] Cooksey J， Ford R， Kocieński P， et al. A synthesis of （-）-ebelactones A and B［J］. Tetrahedron，2010，66（33）：6462-6467.

[26] 李金娥，王敏，陈义华. 链丝菌素类抗生素的研究进展［J］. 微生物学报，2016，56（3）：363-372.

[27] Guo S， Hu C Q， Qing M， et al. Uncovering the cytochrome P450-catalyzed methylenedioxy bridge formation in streptovaricins biosynthesis［J］. Nature Communications，2020，11（1）：4501.

[28] 梁淑芳. 基于合成生物学策略创制微生物天然产物［J］. 四川师范大学学报（自然科学版），2022，45（5）：585-594.

基金资助

四川省自然科学基金(2023NSFSC0134)