5%高效氯氟氰菊酯对异迟眼蕈蚊及昆虫病原线虫的毒力毒性测定

Virulence of 5% lambda-cyhalothrin to Bradysia difformis Frey and entomopathogenic nematodes

摘要

目的 探讨5%高效氯氟氰菊酯与昆虫病原线虫是否可以混用，以及探讨两种方式混用对异迟眼蕈蚊（Bradysia difformis Frey）的防治效果。 方法 采用培养皿滤纸法，分别测定了5%高效氯氟氰菊酯对异迟眼蕈蚊三龄幼虫的毒力，以及对斯氏昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT的毒性，并计算毒力回归方程及致死中浓度，以评价该线虫与5%高效氯氟氰菊酯能否混用来防控异迟眼蕈蚊。 结果 5%高效氯氟氰菊酯对异迟眼蕈蚊的控制效果较差，且对昆虫病原线虫的毒性较大。 结论 在实际应用中，不能将昆虫病原线虫与5%高效氯氟氰菊酯混用来防治异迟眼蕈蚊。

Abstract

Objective The study aimed to explore the control effectiveness of 5% beta-cyhalothrin mixed with entomopathogenic nematodes against Bradysia difformis Frey. Method To evaluate whether nematodes and pesticides could be mixed in the control of the Bradysia difformis Frey, we firstly tested the virulence of 5% beta-cyhalothrin both to the third instar larvae of Bradysia difformis Frey and to the entomopathogenic nematode Steinernema Feltiae 0619HT by the petri plate filter paper method, and then calculated the toxicity regression equation and lethal median concentration. Result Our results showed that 5% beta-cyhalothrin was less effective in controlling Bradysia difformis Frey and was strongly toxic to entomopathogenic nematodes. Conclusion It was suggested that the entomopathogenic nematodes cannot be mixed with 5% beta-cyhalothrin in the control of Bradysia difformis Frey in practice.

Graphical abstract

关键词

昆虫病原线虫 / 异迟眼蕈蚊 / 高效氯氟氰菊酯 / 毒力测定

Key words

entomopathogenic nematode / Bradysia difformis Frey / beta-cyhalothrin / virulence determination

异迟眼蕈蚊Bradysia difformis Frey，属双翅目，眼蕈蚊科^［1-3］。在甘肃省异迟眼蕈蚊不仅是食用菌产业的重要害虫，也严重为害韭菜、大葱等葱蒜类作物，常与韭菜迟眼蕈蚊 （Bradysia difformis FreyYang et Zhang） 混合发生^［4］。

目前，异迟眼蕈蚊防控仍以化学药剂防治为主，在实际生产过程中由于片面追求防治效果，菜农选用高毒农药如辛硫磷、毒死蜱等进行灌根^［5］。过度使用化学农药，不仅会带来农药残留超标和环境污染，而且害虫也会产生抗药性^［6-7］，因此需要开发生防制剂或采用其他防治手段，实现异迟眼蕈蚊的绿色有效防控。

韭菜异迟眼蕈蚊的绿色防控技术包括高效低毒农药和生物防治^［8］。高效氯氟氰菊酯以低毒、广谱、生物活性高、环境相容性好等优点，在农作物病虫害防治中占有重要地位^［9-13］；昆虫病原线虫 （entomopathogenic nematode，EPN） 是昆虫的专化性寄生天敌，它寄主范围广，对寄主特别是土栖性及钻蛀性害虫具主动搜寻能力，对人畜和环境安全，且对害虫的天敌没有明显的负作用，易于大量培养，使用方便，在环境中可循环利用^［14-15］。

已有研究证实，昆虫病原线虫对韭菜异迟眼蕈蚊具较好的控制效能，但见效不及化学农药迅速。Koppenhöfer等^［16］研究认为两种防治方法对某一害虫的联合使用，可对害虫的杀灭速度和死亡率产生拮抗、叠加或增效作用，所以将生物防治与化学防治合理结合，是异迟眼蕈蚊综合防控的一个值得探索的途径^［17］。目前有关昆虫病原线虫与化学药剂混用的研究已有报道，如昆虫病原线虫与噻虫嗪混用对异迟眼蕈蚊幼虫的防治^［18］、与倍内威混用对青菜黄曲跳甲的防治^［17］、与低浓度吡虫啉混用对理暗黑金龟的防治等^［19］。虽然昆虫病原线虫可以与许多农药兼容混合使用，但也有许多农药对线虫有毒性，因此任何新的线虫与农药组合都需要评估相容性^［20］，昆虫病原线虫与杀虫剂不能简单混配使用，必须进行相关的耐受性与安全性试验，筛选出对线虫无毒性的药剂及药剂浓度。

为此，本试验通过高效氯氟氰菊酯对异迟眼蕈蚊毒力测定，及对昆虫病原线虫的毒性测定，评估昆虫病原线虫和高效氯氟氰菊酯能否混用，旨为昆虫病原线虫的田间应用和韭菜异迟眼蕈蚊的综合治理提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 供试昆虫和昆虫病原线虫

昆虫病原线虫采用斯氏线虫S. kraussei 0657L和短尾异小杆线虫H. brevicaudis 0641TY品系的三龄侵染期幼虫，保存于甘肃农业大学植保学院农业昆虫与害虫防治实验室4 ℃冰箱中。

扩繁材料大蜡螟（Galleria mellonella）购自天津玉米虫养殖场，使用前经滞育处理，防止大蜡螟老熟幼虫吐丝、化蛹。

异迟眼蕈蚊Bradysia difformis Frey采于甘肃省天水市甘谷县（该地区异迟眼蕈蚊为韭菜、平菇、花卉等设施作物害虫的优势种，严重威胁该地区农业发展）。在实验室采用滤纸保湿培养法进行人工饲养，扩繁若干代并获得稳定种群以供试验使用。

1.2 供试药剂

5%高效氯氟氰菊酯乳油（江门市大光明农化有限公司生产）。

1.3 试验方法

1.3.1 昆虫病原线虫悬浮液的获取

以大蜡螟为寄主昆虫，准备规格为90 mm的培养皿，于培养皿底部垫两层滤纸，将生长状况一致的8头大蜡螟放入其中，将活力较好的线虫悬浊液用移液枪淋洒到每个培养皿（滤纸湿润即可，湿度不可过大），盖上培养皿放入恒温箱进行侵染培养。选取两个大小不同的培养皿，在小培养皿（规格为90 mm）底部垫两层滤纸放入大培养皿（规格为150 mm）中，于大培养皿中加入蒸馏水，将死亡的大蜡螟放置在小培养皿的滤纸上，待昆虫病原线虫大量爬入蒸馏水中时，收集蒸馏水即可获得昆虫病原线虫悬浮液。收集昆虫病原线虫悬浮液，并保存于4 ℃ 冰箱。用于试验的线虫保存时间不得超过15 d。

1.3.2 异迟眼蕈蚊的获取

异迟眼蕈蚊幼虫采自甘肃省天水市甘谷县韭菜种植大棚，种群个体采用滤纸保湿培养法（将脱脂棉垫于9 cm×9 cm培养皿底部，使用滤纸覆盖脱脂棉后加水保湿），并以韭菜鳞茎为食，在温度（25 ± 1）℃、光周期16 h光/8 h暗、相对湿度（65± 5）%的光照培养箱中，连续饲养 3 代，随机选取正常存活的3龄幼虫进行试验。

1.3.3 5%高效氯氟氰菊酯乳油对异迟眼蕈蚊的毒力测定

采用培养皿滤纸法^［18］：用蒸馏水稀释5%高效氯氟氰菊酯乳油，设置药液浓度梯度为20、40、60、80、100 mg/L，以蒸馏水为对照。在直径9 cm的培养皿底垫一层滤纸，再滴加药液1 mL。在经上步处理的培养皿中放入10头异迟眼蕈蚊的3龄幼虫，并加入适量剪为0.5 cm左右的韭菜茎基部白色部分作为饲料，盖上培养皿的盖子，每个浓度5次重复。将所有的处理置于（25±1）℃的恒温培养箱黑暗处理24 h后，检查各处理幼虫的存活情况，并用小毛笔笔尖轻触碰虫体，毫无反应的记作死亡，最后计算死亡率和校正死亡率。

1.3.4 5%高效氯氟氰菊酯乳油对昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT的毒力测定

通过蒸馏水稀释昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT，使线虫悬浮液的密度控制在500头/mL；

用蒸馏水稀释5%高效氯氟氰菊酯乳油，设置药液浓度梯度为20、40、60、80、100 mg/L，以蒸馏水为对照。在直径9 cm的培养皿中用移液枪分别吸取每个浓度的药液1 mL转入，同时加入7 mL的昆虫病原线虫悬浮液，摇匀，加盖，每个处理进行5次重复。在（25±1）℃的恒温培养箱内黑暗处理24 h后，再使用解剖镜随机检查每个处理30 μL混合液中昆虫病原线虫的存活头数，并计算其死亡率。

药剂处理昆虫病原线虫后其表现为3种不同的反应^［19］：1）死亡：针刺无反应，虫体僵直或卷曲，不活动；2）亚致死：针刺反应迟缓或无反应，虫体卷曲，由于药剂麻痹作用会有痉挛症或抽搐性活动；3）药剂无影响：同对照组线虫一样，身体活动而且舒展，静止的线虫使用探针碰触后迅速做出反应。

1.4 数据处理

试验数据用SPSS 26.0软件对所测数据统计分析，使用Excel进行绘图。

2 结果与分析

2.1 5%高效氯氟氰菊酯乳油对韭菜异迟眼蕈蚊的影响

在设置的浓度范围内，异迟眼蕈蚊幼虫的死亡率与5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度呈正相关（r₁=0.783），随着5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度的增加，异迟眼蕈蚊幼虫的死亡率增加。当5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度为40 mg/L时，异迟眼蕈蚊幼虫的死亡率为26.7%；5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度在40%~80% mg/L时，异迟眼蕈蚊幼虫的死亡率继续增大，在80 mg/L时死亡率达53.3%；5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度在100 mg/L，异迟眼蕈蚊幼虫的死亡率为63.4%。毒力回归方程为：y=11.655x-5.652，标准系数r₁=0.783，95%的置信区间为0.872~2.46，LC₅₀=77.16 mg/L。

2.2 5%高效氯氟氰菊酯乳油对昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT的影响

在设置的浓度范围内，昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT品系的死亡率与5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度呈正相关（r₂=0.945），随着5%高效氯氟氰菊酯乳油浓度的增加，昆虫病原线虫Steinernema feltiae 0619HT品系的累计校正死亡率增加。毒力回归方程为：y=0.296 1x+17.599，标准系数r₂=0.945，95%的置信区间为1.714~2.482，LC₅₀=109.425 9 mg/L。

3 讨论

不同品系的昆虫病原线虫与不同的化学农药的混合使用，在农业生产中已成为新型防治害虫的手段，而农药对目标害虫与病原线虫的毒力测定是衡量是否可以混用的前提。本次试验使用5%高效氯氟氰菊酯乳油对昆虫病原线虫和异迟眼蕈蚊幼虫进行毒力测定，5%高效氯氟氰菊酯乳油药剂单独作用于异迟眼蕈蚊幼虫时，浓度越高控制效果越好，但致死中浓度为77.16 mg/L，相比较其他化学药剂，如吡虫啉对异迟眼蕈蚊幼虫的LC₅₀=12.68 mg/L^［8］，5%高效氯氟氰菊酯乳油的毒力较差，不推荐单独使用防治异迟眼蕈蚊幼虫；此外，将%高效氯氟氰菊酯乳油药剂单独作用于异迟眼蕈蚊幼虫的LC₅₀代入5%高效氯氟氰菊酯乳油对昆虫病原线虫的毒力回归方程，得到昆虫病原线虫的死亡率为40.45%，该药剂对昆虫病原线虫的毒杀作用过强，两者无法混用。

4 结论

5%高效氯氟氰菊酯乳油对异迟眼蕈蚊幼虫的毒力低，对昆虫病原线虫的毒性过高，所以不建议将5%高效氯氟氰菊酯乳油与昆虫病原线虫混合使用防治异迟眼蕈蚊。

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基金资助

国家自然科学基金项目(31960559)

甘肃农业大学科技创新基金-学科建设专项(GAU-XKJS-151)

甘肃省科技计划项目(21JR7RA819)