季节对海狸色公獭兔血液性激素水平和精液品质的影响

Seasonal influences of sexual hormones and sperm qualities to male beaver Rex rabbit

摘要

目的 研究海狸色公獭兔血液中性激素和精液品质随季节变化的规律。 方法 选择36只3月龄公兔做为试验样本，于2020年12月~2021年11月分别采集12月（3月龄）、2月（5月龄）、4月（7月龄）、6月（9月龄）、8月（11月龄 ）的颈静脉血样本5.0mL，经ELISA方法测定血清中促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）和睾酮（T）的变化情况。公兔精液从2月（5月龄）开始同步采集，检测精子活力、精子畸形率、精子密度。 结果 性激素水平分析表明：卵泡刺激素（FSH）在2月份达到峰值，极显著高于其它各月（P<0.01）；促卵泡素（LH）在4月份达到峰值，极显著高于其它各月（P<0.01）；睾酮（T）在2月和6月龄达到峰值，极显著高于其它各月（P<0.01）。精子活力2月份最高（0.59±0.034），4月（0.56±0.013）、6月（0.49±0.011）、8月（0.37±0.008）逐渐下降，各月之间差异极显著（P<0.01）；精子畸形率2月（0.065 7±0.008 2）、4月（0.059 0±0.004 6）、6月（0.061 7±0.005 0）极显著低于8月（0.114 2±0.004 9）（P<0.01）；精子密度2月（1.88±0.11亿个/毫升）极显著高于4月（1.33±0.12亿个/毫升，P<0.01）和6月（1.54±0.12亿个/毫升，P<0.01），显著高于8月（1.64±0.14亿个/毫升，P<0.05）。相关性分析显示：2月FSH浓度与2月（γ=0.477）、4月（γ=0.352）、6月（γ=-0.261）T值浓度呈显著或极显著的相关性（P<0.05，P<0.01）；4月LH浓度与4月T浓度（γ=0.513）的相关性最高；4月LH的浓度与4月T的浓度呈现显著负相关性（γ=-0.295）（P<0.05）；12月龄的FSH水平与4月龄精子密度呈极显著相关（P<0.01）；12月龄LH水平与6月和8月龄精子密度呈极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）相关；6月龄T水平与4月龄精子密度呈显著相关（P<0.05）。 结论 公兔一年四季均可配种使用，最佳配种季节为春季和秋冬季，且FSH、LH和T的分泌具有协同作用，并影响了精子密度。

Abstract

Objectives In order to study seasonal variation of sexual hormones of male Rex rabbit. Method 36 two- month-old male Rex rabbits were selected and 5.0mL of their jugular blood from December 2020 to November 2021 were collected，and the changing rules of follicle stimulating hormone (FSH)，luteinizing hormone (LH)，testone (T) were measured using ELISA method. Result The results showed that，FSH level reached the peak at February，significantly higher than other months (P<0.01); LH level reached the peak at April，significantly higher than other months (P<0.01); T level showed two peaks at February and June respectively，both were significantly higher than other months (P<0.01).The sperm motility was highest at February (0.59±0.034)，and gradually reduced at April (0.56±0.013)，June(0.49±0.011) and August(0.37±0.008)，with the significant differences among seasons (P<0.01); sperm deformity rate at February (0.0657±0.0082)，April(0.059±0.0046)，June(0.0617±0.0050) were significantly lower than August(0.1142±0.0049) (P<0.01); sperm density at February((1.88±0.11)×10⁸/mL) was strongly significantly higher than April((1.33±0.12)×10⁸/mL)，June((1.54±0.12)×10⁸/mL)(P<0.01)，significantly higher than August((1.64±0.14)×10⁸/mL) (P<0.05).The correlation analysis showed that FSH level at February was significantly correlated with T level at February（γ=0.477），April（γ=0.352）and June（γ =-0.261）（P<0.05，P<0.01）; LH level at April was significantly correlated with T level at April（γ=0.513）(P<0.05); and LH level at April was negatively correlated with T level at April（γ=-0.295）(P<0.05).The FSH level at December was significantly correlated with sperm density at April (P<0.01); and the LH level at December were strongly significantly correlated with sperm density at June (P<0.01)，significantly correlated with sperm density at August (P<0.05); the T level at June were significantly correlated with sperm density at April (P<0.05).This study showed that the best breeding season for male rabbit was spring，the worst mating season was summer and beginning of autumn，and the secretion of FSH，LH and T had synergy，which were influenced sperm density. Conclusions This study proved that male rabbit can breed all seasons，and the optimal mating season is Autumn and Spring，and the secretion of FSH，LH and T were in coordination，and influenced the density of sperm.

Graphical abstract

关键词

公兔 / 性激素 / 季节 / 精液品质 / 变化规律

Key words

male rabbit / sexual hormone / season / sperm quality / variation rules

家兔属于常年发情的多胎哺乳动物，其繁殖性能受到品种、营养水平、温度、光照等多种因素的影响，其中血液性激素水平对于雌性动物卵泡发育和雄性动物精子生成具有重要作用^［1］。目前，国内大量研究集中于季节和光照对于母兔发情、繁殖性能和血液激素水平的影响^［2-4］，但在家兔育种和生产中，常采用公母比例为1∶10的配种方式^［5］，公兔对于整个兔群生产性能的作用更加重要，因此研究公兔性激素和精液品质随季节变化的规律对于其合理利用和配种方案的制订具有一定意义。

在哺乳动物的生殖过程中，已认识到生殖内分泌对繁殖的核心调控作用。在经典的下丘脑-垂体-性腺（HPG）轴中，促性腺激素是由下丘脑分泌的促性腺激素释放激素（GnRH）经下丘脑-垂体门脉循环到达垂体前叶后，与垂体前叶的促性腺激素分泌细胞膜上特异性受体结合，激活腺苷酸环化酶（cAMP），促进LH和FSH的合成，后释放至动物的外周血，作用于雄性动物的睾丸和雌性动物的卵巢，调控精子的生成和卵泡的发育及排卵^［6］。睾酮作为主要的雄激素由睾丸间质细胞产生，对于公畜繁殖行为的产生和精子成熟等具有关键作用^［6］，其分泌规律与促黄体素（LH）水平的变化具有一定关联。

对于季节性繁殖动物，解生彬等研究了雄性麋鹿血浆中FSH、LH和T的季节性变化，发现6月份麋鹿睾酮（T）水平较高^［7］。贾义平等^［8］检测了赤腹松鼠血清中促性腺激素释放激素（GnRH）、促卵泡素（FSH）、LH和T的水平，并发现上述激素的分泌均在2~3月和7~8月达到峰值。谢惠春等^［9］研究了高原鼠兔繁殖季节前后血常规和性激素水平的变化，发现这些指标都呈现明显的季节性变化。在精液品质方面，孟晨光等^［10］研究了不同季节对猪精子畸形率的影响，发现8月份精子畸形率最高，达到26.33%，2月份精子畸形率最低，为8.39%。赵尚尚等^［11］研究了不同季节对公牛精液品质的影响，发现春季的精液品质显著高于其它季节。Mathur等^［12］对印度半干旱地区的安哥拉公兔进行了精液品质的测定，认为最适合家兔繁育的季节为春季和冬季的后一个月。徐立德等^［13］选用安哥拉兔进行高温季节精液品质的研究，发现高温会显著影响家兔的精子活力。家兔虽然不是季节性发情动物，但其性激素的分泌和精液品质仍受到季节和温度的影响，因此，研究不同季节血液性激素的变化以及精液品质的协同变化规律对于掌握家兔繁殖规律具有基础性作用。

1 材料与方法

1.1 试验动物与样品采集

试验用公兔选自山西农业大学（山西农业科学院）动物科学学院种兔场，选择3月龄左右断奶、体型大小相近、健康状况良好的海狸色獭兔公兔36只，单笼饲养，自由饮水，专人每日饲喂颗粒料2次，分别为早8∶00和晚5∶00，兔舍采用自然光照明。

于2020年12月至2021年8月（公兔月龄：3月~11月）每2个月采集试验兔耳缘静脉血5 mL，EDTA抗凝处理。采血当日先将试验兔置于暖气旁加热30 min左右，一人保定，一人用4^#采血针采血，上下轻柔颠倒采血管5~10次，避免血液凝固，然后迅速置于4℃保温箱内保存，采血完毕后2 h内送至实验室处理。用于采血的试验兔在采血前用电子秤称质量，精度为5 g。

公兔从5月龄开始（2021年2月~2021年8月）与采血同步进行精液采集。采精采用假阴道法，事先准备50 ℃左右的热水、试情母兔、假阴道、集精杯，先将假阴道放入热水中保温，用母兔诱导，待公兔爬跨后迅速按压其头部，迅速将假阴道和集精杯放入公兔两腿之间收集精液，分装至1.5 mL EP管中，37 ℃保温。

1.2 性激素含量测定

抗凝血在1 000 g下低温（4 ℃）离心30 min，分离血清。采用兔血清睾酮（T）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）ELISA检测试剂盒（上海江莱生物科技有限公司）对公兔血清中性激素水平进行检测，检测原理为双抗夹心法。试验前，先将血清静置1h，平衡至室温（25 ℃），采用兔FSH（标准品浓度：0、0.5、1、2、4、8 mIU/mL）、LH（标准品浓度：0、3、6、12、24、48 mIU/mL）和T（标准品浓度：0、20、40、80、160、320 pg/mL）单抗包被好的96孔板检测，设6个标准品孔、对照孔和样品孔，每个样品设2个平行孔，每孔先加10 μL血清，对照孔加等量蒸馏水，然后每孔加40 μL样品稀释液，混匀后加HRP（辣根过氧化物酶标记）酶标试剂100 μL，37 ℃下温育60 min，洗涤5次后显色，37 ℃孵育15 min后终止反应，采用酶标仪（BioTek Cytation5，美国）450 nm下检测吸光值，利用标准曲线方程计算出血清中的性激素含量。

1.3 精液品质测定

采精后1 h内进行精子活力和密度检测。室温静置3 min后，取100 μL鲜精加入400 μL含有台盼蓝的精子稀释液（索莱宝公司，北京）混匀稀释。取20 μL稀释液加入37 ℃预温的血球计数板凹槽内，迅速用盖玻片覆盖后在100×显微镜下观察，统计视野内25个中方格中央和四角共5个方格中直线运动的精子数，同时计数非直线运动的精子数（包括死精子、原地摆动精子、旋转运动精子），计算精子活力和密度计算精子活力和密度。采用公式：

精子总数/毫升=5个中方格中精子数/80×100×10×稀释倍数×1 000（1）

精子活力=\frac{\mathrm{精子}\mathrm{总数}-\mathrm{非直}\mathrm{线运}\mathrm{动的}\mathrm{精子}\mathrm{数}}{\mathrm{精子}\mathrm{总数}}（2）

精子密度观察采用姬姆萨（G-Clone）染色液制作涂片。取姬姆萨浓缩液1 mL，与姬姆萨稀释液9 mL充分混匀，制成精子染色工作液。取20 μL精液稀释液滴在载玻片中央，制备涂片，晾干后，用甲醇固定3 min，然后用染色液室温下染色30 min，自来水冲洗涂片，晾干后400×显微镜下观察精子形态。畸形精子分为：头部异常、颈部异常、尾部异常、顶体异常、原生质滴五种形态，镜下计数300个精子，计算精子畸形率采用公式：

精子畸形率=畸形精子数/300×100%

1.4 数据分析

采用Excel 2016进行数据的初步分析处理，计算不同检测时间点血液中性激素浓度、精液品质的平均值和标准差（标准误）。采用SPSS 24.0中ANOVA程序对不同月龄性激素水平、精子活力、精子密度和精子畸形率进行方差分析，采用Duncan’s法进行多重比较，并绘制性激素含量和精液品质随季节变化的折线图。

协方差分析是结合回归分析和方差分析的一种分析方法，用于消除两组或多组修正均数之间有无差异，并消除混杂因素（协变量）对于分析指标影响的一种分析方法^［15］。本研究中，由于在每个测定时间点公兔体质量不断变化，可能对血液中性激素水平造成干扰，因此，采用SPSS 24.0软件中一般线性模型中的协方差分析进行不同采样时间点间激素水平的方差分析，采用模型为：

y_{ijk}=\mu +m_i+{\beta }_e(x_{ij}-\mu )+repea{t}_j+e_k

式中：y_ijk 为激素浓度，m_i 为测定月龄固定效应，β_e（x_{ij-μ）为协方差项，repeatj为个体随机效应，ek为残差。}

不同测定时间点激素水平间的相关性和显著性水平采用SPSS24.0的相关模块进行计算。

2 结果与分析

2.1 不同检测时间点血液性激素水平

试验检测了2020年12月、2021年2月、4月、6月、8月海狸色公獭兔血清中睾酮（T）、促卵泡素（FSH）、促黄体素（LH）的浓度水平，对应的体质量和激素水平如表1所示。

由表1所示，海狸色公獭兔血清中不同月龄促卵泡素（FSH），促黄体素（LH）和睾酮（T）水平存在极显著（P<0.01）差异，具有明显的季节性变化规律。其中，2月FSH水平极显著高于其它月（P<0.01），4月FSH水平极显著高于6、8、10月龄水平（P<0.01），8月水平极显著低于6、8月龄水平（P<0.01）；LH水平4月极显著高于其它月龄（P<0.01），4月和8月水平差异不显著，2月和6月龄水平差异不显著，且2月和6月水平极显著高于4月和8月水平（P<0.01）；T水平6月水平极显著高于其它月龄（P<0.01），4月和8月水平差异不显著，2月水平极显著高于12、4、8月水平。（P<0.01），8月水平极显著高于4月水平（P<0.01）。

2.2 不同检测时间点精液品质比较

海狸色公獭兔各月龄精子活力、精子密度和畸形率的测定结果见表2。，精子密度春季最低，夏季和秋季逐渐升高。冬季精子密度极显著高于春季和夏季（P<0.01），显著高于秋季（P<0.05），但春季、夏季和秋季差异不显著。

由表2可知，不同月龄时公兔的精子活力、精子密度和畸形率均存在显著和极显著差异。其中，5月龄（2月份测定）精子活力极显著高于7月（4月份测定）、9月（6月份测定）和11月龄（8月份测定）（P<0.01），7月龄精子活力极显著高于9月和11月龄（P<0.01），9月龄精子活力极显著高于11月龄（P<0.01）；精子密度5月龄极显著高于7月和11月龄（P<0.01），5月龄显著高于9月龄（P<0.05），而7月龄、9月龄和11月龄之间无显著差异；精子畸形率11月龄极显著高于其它各月龄（P<0.01），但其它各月龄之间差异不显著。说明采精季节对公兔精液品质有明显的影响。

由图1可知，不同时间点FSH、LH和T水平与精子活力和畸形率之间无协同变化关系，但公兔精子活力冬季最高（59%），春季（56%）、夏季（49%）和秋季（37%）逐渐下降，说明精子活力随着气温升高而下降，冬春季节较高，夏秋季节较低；精子畸形率则表现出相反的趋势，即冬季（6.57%）、春季（5.90%）、夏季（6.17%）较低，秋季（11.42%）较高，说明随着气温升高，精子畸形率呈现升高趋势。

由图2可知，不同月龄性激素浓度睾酮（T）最高，促卵泡素（FSH）次之，促黄体素（LH）最低。其中，FSH峰值出现在4月份，LH峰值出现在2月份，T则出现两个峰值，分别为2月份和6月份。FSH最低值出现在8月份，LH最低值出现在2月和8月，T最低值出现在4月份。

2.4 公兔初始体质量的协方差分析

由于检测血液中激素含量过程中，公兔体质量随月龄不断变化，可能是干扰激素测定结果的一个因素，因此需要将体质量设定为协变量，分析其对最终结果的影响。

根据协方差分析的一般步骤，首先根据体质量作分组散点图，进行线性趋势的判断，然后进行预分析^［16］，看协方差和固定因子之间的交互作用有无统计学意义，结果如表3所示，针对FSH、LH和T的协变量检测结果显示，时间×体质量的检验结果均不显著，因此可进行后续的协方差分析。

协方差分析中的比较修正均数有无差异^［11］，由于预分析过程中得出交互项（时间×体质量）检验结果不显著，可将该项从后续分析中剔除，并比较各组修正均数有无差异，结果如表4所示。体质量作为协变量对于FSH、LH和T三种激素的最终测定结果影响均不显著（P >0.05），可认为公兔的初始体质量并未对血液激素测定值产生干扰，ELISA测定结果可信。

2.5 不同检测时间点血液性激素水平与精液品质的相关性分析

对不同检测时间点的3种血液性激素水平与精子密度进行Pearson’s相关性计算。由表5可知，12月FSH的水平与2月和8月FSH水平呈显著正相关（P<0.05，P<0.01），与4月LH水平呈极显著正相关（P<0.01），与12月、2月和8月T水平呈极显著正相关（P<0.01）；2月FSH水平与2月和4月LH水平呈极显著正相关（P<0.01），与2月T水平呈极显著正相关（P<0.01）；4月FSH水平与8月FSH水平呈极显著正相关（P<0.01），与4月和8月LH水平呈极显著正相关（P<0.05，P<0.01），与8月T水平呈极显著正相关（P<0.01）；6月FSH水平仅与6月T水平呈显著正相关（P<0.05）；8月FSH水平分别与12月、4月和8月LH水平呈显著相关（P<0.05，P<0.01），与6月和8月T水平呈极显著相关（P<0.01）。

对于LH，12月LH水平仅与4月LH水平呈极显著正相关（P<0.01），与4月T水平呈极显著负相关（P<0.01）；2月LH水平与4月LH水平呈显著正相关（P<0.05），与2月、4月、6月T水平呈显著和极显著相关（P<0.01，P<0.01，P<0.05）；4月LH水平与8月LH水平呈极显著正相关（P<0.01），与所有检测月的T水平均存在显著或极显著相关（P<0.01，P<0.01，P<0.01，P<0.05，P<0.01）；6月LH水平仅与8月LH水平呈极显著正相关（P<0.01）；8月LH水平与4月LH水平呈极显著负相关（P<0.01），与6月和8月LH水平呈极显著正相关（P<0.01）。

对于T，12月T水平与4月和6月T水平呈显著和极显著负相关（P<0.01）；2月T水平与8月T水平呈显著正相关（P<0.05）；4月T水平与6月T水平呈极显著负相关（P<0.01）。

对于精子密度，12月龄的FSH水平与4月龄精子密度呈极显著相关（P<0.01）；6月和8月龄精子密度与12月龄LH水平呈极显著（P<0.01）和显著（P<0.05）相关；4月龄精子密度与2月龄LH水平呈极显著相关（P<0.01）；4月龄精子密度和6月龄T水平呈显著相关（P<0.05）。

3 讨论

3.1 公兔血液中性激素的季节性变化规律

对于雄性哺乳动物，FSH可刺激曲精细管上皮和次级精母细胞的发育，但FSH对精子的成熟无作用，须与LH协同作用才能刺激精子发育成熟，同时FSH与维持曲精细管内T的高水平有关^［17］。LH的作用主要是刺激睾丸间质细胞发育和睾酮分泌，并可在FSH和T的协同下，促进精子成熟^［17］。T则在雄性动物繁殖行为的产生，精子成熟方面发挥关键性作用。在雄性动物的下丘脑-垂体-睾丸轴中，FSH，LH和T三种激素以协同作用的方式调控生殖过程，并且受到温度、光照、季节、营养等因素的影响^［17-18］。

从分泌规律来看，公兔FSH在2-3月龄时分泌达到峰值，与贺建宁等（2013）对小尾寒羊不同季节激素分泌规律的研究结果基本一致；但LH的分泌在4月达到峰值，与小尾寒羊冬季激素水平最高不同^［19］，与其它季节性发情动物，如：赤腹松鼠、麋鹿、斑羚等具有明显差异^{［7-8，20］}。公兔的T水平在全年呈现两个高峰，且在4-5月最低，其血清中含量显著高于FSH和LH在血清中的含量，这与解生彬等（2018）对于不同季节麋鹿血液中性激素水平的研究一致^［7］。潘雨来等（2014）研究了季节对新西兰白兔繁殖性能的影响，发现春季（5月份）雌兔的繁殖性能总体优于其它季节，夏季最差，秋季繁殖性能呈现上升和恢复趋势（9-10月份）^［21］。这与本研究中春季（2-4月）公兔FSH和LH激素浓度升高并达到峰值一致，但T的水平表现出随季节的波动性变化，可能受季节的影响不明显。说明家兔一年四季均可进行配种使用，但夏季精子活力和畸形率较高，精液品质较差，建议补充饲喂青绿饲料后配种使用。

3.2 公兔精液品质的季节变化规律

由图3可知，海狸色獭兔公兔精子活力随季节变化情况为：冬季精子活力最高，春季、夏季、秋季依次下降，8月份最低，仅为0.37；精子畸形率呈现相反的变化趋势，冬季最低、春季、夏季、秋季依次升高，8月的畸形率显著高于其它各测定月；精子密度春季最低，夏季、秋季逐渐升高。赵尚尚等^［11］在对5个不同公牛品种精液品质的研究中发现，春季精子活力和密度最高，分别达到82.87%和11.99×10⁷个/mL。孟晨光^［10］研究发现，8月份公猪的精子畸形率最高，2月份最低，与本研究的结果一致。Mathur^［12］认为，最适合安哥拉公兔繁育的季节为春季（3月~5月）和冬季的后一个半月（2月），夏季开始的两周精液品质下降（6月开始），秋季的前一个月精液品质最差（8月）。徐立德^［13］研究表明，安哥拉兔的精液品质在温度超过25 ℃时开始下降，高温对公兔精子有明显影响。上述研究结果与本研究一致，公兔精子对高温敏感，精子活力夏初开始下降，夏末秋初由于热应激的作用，精子活力最差，精子畸形率在秋初快速上升，不宜配种繁殖；冬末春初公兔的精子活力最高，畸形率最低，适宜进行采精和配种。精子密度春季最低，与陈宗见等^［14］对不同季节对公猪精子密度影响的研究结果基本一致。

3.3 家兔血液中性激素水平与精液品质的协同变化

由图2可以看出，海狸色獭兔公兔FSH的峰值出现在2~3月，LH的峰值出现在4~5月，T则呈现波动性变化，峰值出现在2~3月和6~7月，说明FSH的峰值出现在LH之前，且LH的峰值与T的最低值同时出现。结合表5，月龄FSH浓度与2月（γ=0.477）、4月（γ=0.352）、6月（γ=-0.261）T值浓度呈显著或极显著的相关性；4月LH浓度与4月T浓度（γ=0.513）的相关性最高，与FSH、LH和T之间存在协同作用的理论一致。

从不同性激素变化情况和相关性来看，2月FSH的浓度与2月LH（γ=0.389）和4月LH（γ= 0.359）的浓度具有较强的相关性，但仅与2月的T浓度（γ= 0.430）具有较强相关。有研究表明，FSH主要通过作用于睾丸支持细胞间接刺激精子的发生，并促进雄性激素结合蛋白（ABP）的合成，维持雄激素的较高浓度，在精子发生过程中有一种始动作用，即发动生精作用^［23］，但成熟精子的产生则是通过LH的作用。因此对于公兔，在初情期，FSH可能启动了生精作用，在LH的作用下产生成熟精子，其准确的作用机制还需要进一步的试验研究。

4月LH的分泌与4月T的分泌呈现显著负相关（γ=-0.295），而2月（γ=0.513）和4月（γ=0.207）时T浓度出现峰值，此时LH的分泌均处于下降期。从公畜生殖内分泌调控的角度，LH可与睾丸间隙细胞上特殊受体结合刺激睾酮和其它类固醇激素的生成，睾丸间隙细胞受LH刺激后产生T，初情期后，T逐渐达到动物成年时的水平，并逐渐形成对LH分泌的负反馈调节^［16］，这可能是出现上述负相关的原因。

由表5可知，夏季（公兔7月龄）LH浓度与春季（公兔5月龄）精子密度呈显著负相关（γ=-0.313）；夏季（公兔7月龄）T浓度与春季（公兔5月龄）精子密度呈极显著负相关（γ=-0.561）。由于公兔3月龄时尚不能产生成熟精子，所以没有对3月龄FSH、LH和T的浓度与精子密度之间的相关性进行计算。5月龄公兔达到性成熟时的精子密度与7月龄LH和T浓度分别呈显著（P<0.05）和极显著（P<0.01）的负相关关系，说明促黄体素和睾酮对精子的产生起到重要调控作用。

3.3 其它因素对公兔性激素水平的影响

雄性动物的性激素水平主要受到动物品种、日粮营养水平、日照长度、季节、温度等因素的影响。本研究中所采用的实验动物均为纯种海狸色獭兔且日龄、体质量相近，在试验期内采用中等营养水平日粮，饲养环境一致，采精时间集中在2天内，所以基本不存在其它固定因素的影响。

本研究选择的试验动物为3月龄左右的公兔（平均体质量为1 800 g），试验结束时试验兔日龄为10月龄（平均体质量为3 400 g），体质量可能也是需要考虑的对性激素分泌水平影响的一个因素，但公兔一般在4月龄进入初情期，体成熟在6月龄左右^［23］，可产生成熟精子，且协方差分析结果（表3、表4）也表明体质量对激素含量影响不显著，因此，认为ELISA检测的性激素水平结果正确，未受到协变量的干扰。

4 结论

本研究采用36只海狸色獭兔公兔作为对象，测定了不同季节下公兔血液中促性腺激素、睾酮和精液品质的变化规律并分析了其协同作用关系，认为公兔在春季配种繁殖较好，夏季和秋初由于气候炎热，应补充饲喂青绿饲料改善公兔精液品质。。

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基金资助

山西省省筹出国留学人员科研项目(2020-157)

山西农业大学生物育种工程项目(YZGC127)

国家兔产业技术体系项目(CARS-44-B-3)