基于Stefin抗原兔豆状囊尾蚴病间接ELISA检测方法的建立

摘要

【目的】研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂Stefin的生物活性，建立豆状囊尾蚴病新的、高效便捷的血清学诊断方法。【方法】用Bradford法测定纯化后的重组蛋白浓度。以重组蛋白stefin作为包被抗原，建立间接ELISA诊断方法，通过从抗原包被浓度、包被条件、封闭条件、血清稀释度、酶标二抗稀释度、反应时间、温度等条件，以阳性血清与阴性血清的D450 nm比值（P/N）作为判断标准优化反应条件，并对ELISA方法的敏感性、特异性、重复性进行检测。【结果】测定了重组蛋白浓度。间接ELISA检测方法临界值为0.352。阳性血清稀释倍数至1∶12 800时，D450 nm的值仍大于临界值。兔球虫、兔弓形虫等阳性血清检测显示D450 nm均小于0.352。【结论】Stefin蛋白可以大批量获得，以stefin作为抗原建立的间接ELISA检测方法可以应用于豆状囊尾蚴病的诊断和流行病学调查研究，对豆状囊尾蚴病的有效防控具有重要的意义。

关键词

豆状囊尾蚴 / Bradford / 间接ELISA / Stefin