森林假单胞菌遗传转化体系的建立

摘要

【目的】森林假单胞菌（Pseudomonas silvicola）T1-3-2菌株对多种林木病原真菌有较强的拮抗作用，为研究其代谢产物及其抗生素合成相关基因，需建立该菌株的遗产转化体系。【方法】通过不同试剂处理获得菌株T1-3-2感受态，随后通过热激和电击的转化方法筛选该菌株最优转化体系。【结果】确定菌株T1-3-2最适转化体系为：使用0.3 mol/L蔗糖处理获得的感受态，利用电击方式：电压1 500 V，电阻200Ω，电容25μF，电击5 ms进行转化，转化效率达（8.8±0.24）×10～4 CFU/ng DNA。利用该转化体系，运用质粒pBBR1MCS5-Tac-EGFP和pUTmini-Tn5-Km成功构建了菌株T1-3-2的绿色荧光标记菌株与插入突变体库。【结论】可为解析森林假单胞菌与宿主互作、抑菌和促生机理的研究，以及后期开发应用中工程菌株的改造奠定基础。

关键词

森林假单胞菌 / 遗传转化 / 突变体库