基于斑点杂交技术的6种水果源性成分膜芯片的检测方法构建

摘要

【目的】利用地高辛（digoxigenin,DIG）制备植物核糖体、线粒体片段基因的特异性标记探针，利用斑点杂交技术构建水果及水果饮品中植物源性成分的膜芯片检测方法。【方法】提取苹果、芒果、草莓、香蕉、杏、猕猴桃6种水果的核酸物质，通过聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增6种水果的特异性基因并测序；以地高辛为探针进行产物标记，并将其固定在尼龙膜表面，形成一系列低密度探针阵列。水果基因变性扩增产物形成的单链DNA与尼龙膜上标记的探针杂交，通过底物颜色变化形成肉眼可见的斑点，实现6种水果源性成分的检测。【结果】6种水果基因PCR扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果显示，6种基因组DNA扩增带与目标片段大小相同。测序结果与GeneBank数据库中相应序列一致，GenBank登录号分别为：苹果KY964734.1、芒果MN477188.1、草莓MN601853.1、杏OL662912.1、猕猴桃MK425153.1、香蕉MT555127.1。验证探针的标记效率，将地高辛标记探针稀释至1 ng/μL、10 pg/μL、3 pg/μL、1 pg/μL 4个梯度进行显色反应，地高辛标记探针检测灵敏度为3 pg/μL。6种地高辛标记探针只与其相对应的水果特异性基因PCR扩增产物产生斑点杂交显点，无交叉反应发生，对随机购买的18个水果和果汁饮料样品进行检测，具有良好的特异性和准确性。【结论】结合PCR和可视化膜芯片杂交技术，成功建立了一种可用于水果及水果饮品中植物源性成分检测的膜芯片方法。

关键词

地高辛 / 聚合酶链式反应 / 探针标记 / 斑点杂交 / 膜芯片