卵形鲳鲹干扰素调节因子IRF3的原核表达和多克隆抗体的制备

doi:10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2024050601

海南大学学报（自然科学版中英文） ›› 2025, Vol. 43 ›› Issue (02) : 114 -120. DOI: 10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2024050601

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摘要

干扰素调节因子IRF3可调节干扰素IFN表达，在抗病免疫反应中起重要作用。为了获得卵形鲳鲹IRF3（Tro IRF3）的体外重组蛋白及其多克隆抗体，本研究利用pET32a（+）/Escherichia coli BL21（DE3）表达系统对TroIRF3进行诱导表达，在0.1 mmol·L^-1的IPTG和20℃的条件下诱导24 h，获得可溶性的重组蛋白rTroIRF3，其分子量为51 kDa；经镍离子柱亲和层析纯化，得到电泳纯的rTroIRF3；将rTroIRF3免疫小鼠以制备多克隆抗体，并通过Western Blotting和ELISA检测多克隆抗体的效价，结果显示，所制备的多克隆抗体的效价高达1∶25 600，能与重组蛋白特异性结合，可用于后续探究TroIRF3参与机体抗病原侵染的机制研究。