卵形鲳鲹IRF7的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

吴莹; 周永灿; 孙云

doi:10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2024070101

海南大学学报（自然科学版中英文） ›› 2025, Vol. 43 ›› Issue (02) : 121 -127. DOI: 10.15886/j.cnki.hdxbzkb.2024070101

卵形鲳鲹IRF7的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备

吴莹, 周永灿, 孙云

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摘要

IRF7在免疫调节、抗病毒、抗细菌、细胞增殖和细胞凋亡等方面均发挥着重要作用。目前关于鱼类IRF7在抗病免疫应答方面的研究相对匮乏，本研究以海南深水网箱主要养殖鱼类卵形鲳鲹为研究对象，对卵形鲳鲹IRF7（TroIRF7）进行原核表达、纯化和多克隆抗体制备。首先，构建了TroIRF7的原核表达载体E. coli BL21（DE3）/pET32a-Tro IRF7，然后加入0.1 mmol·L^-1的IPTG于20℃振荡培养24 h，诱导重组蛋白rTroIRF7表达，其次，通过镍离子亲和层析柱对重组蛋白rTroIRF7进行纯化，得到电泳纯的rTroIRF7，最后将电泳纯的rTroIRF7与弗氏（不）完全佐剂混合，然后以此混合剂免疫小鼠，获得鼠抗rTroIRF7的多克隆抗体，Elisa的实验结果显示所制备的多克隆抗体能与重组蛋白结合，抗体效价为1︰25 600。