响应面法优化马齿苋抗炎成分超声提取工艺的研究

Optimization of anti-inflammatory active ingredients by ultrasonic extraction from Portulaca oleracea L. by response surface method

摘要

目的 采用响应面法优化马齿苋抗炎成分的超声提取工艺，并评价其抗炎活性。 方法 以马齿苋为原料，采用超声提取法提取抗炎成分，通过单因素实验和响应面实验对提取工艺进行优化，探究乙醇体积分数、超声时间、超声温度、料液比对马齿苋抗炎成分提取的影响，确定最佳提取工艺参数。采用脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症模型，通过测定NO含量评价马齿苋提取物的抗炎作用。使用ELISA试剂盒测定不同RAW264.7细胞处理组肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6， IL-6）的水平。采用二甲苯致耳肿胀实验建立小鼠炎症模型验证马齿苋提取物的体内抗炎作用。 结果 马齿苋抗炎成分的最优提取工艺参数为提取乙醇体积分数为87%，提取时间为61 min，提取温度为64 ℃，料液比为1∶16；马齿苋抗炎成分能够显著降低RAW264.7炎症细胞NO、TNF-α、IL-6的释放量，同时减轻二甲苯致小鼠耳肿胀的程度。 结论 实验确定了从马齿苋中获得抗炎成分的最佳超声提取工艺，为马齿苋抗炎成分的开发和应用奠定基础。

Abstract

Objective To optimize the ultrasonic extraction process of anti-inflammatory components from Portulaca oleracea L. （P. oleracea） using response surface methodology （RSM） and evaluate its in vitro and in vivo anti-inflammatory activities. Methods P. oleracea was used as the raw material， and ultrasonic extraction was employed to obtain anti-inflammatory components. The extraction process was optimized through single-factor experiments combined with RSM. Four key extraction parameters， including ethanol volume fraction， ultrasonic time， ultrasonic temperature， and solid-liquid ratio， were selected as independent variables to investigate their effects on the anti-inflammatory extract of P. oleracea， and the optimal extraction process parameters were determined. For in vitro anti-inflammatory activity evaluation， a lipopolysaccharide （LPS）-induced RAW264.7 macrophage inflammatory model was established， and the anti-inflammatory effect of P. oleracea extract was assessed by detecting the content of nitric oxide （NO）. Enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA） kits were used to determine the levels of tumor necrosis factor-α （TNF-α） and interleukin-6 （IL-6） in different RAW264.7 cell treatment groups. For in vivo anti-inflammatory activity verification， a mouse inflammatory model was established via xylene-induced ear edema experiment. Results The optimal extraction parameters for anti-inflammatory components from P. oleracea were determined as follows： ethanol volume fraction of 87%， ultrasonic time of 61 min， ultrasonic temperature of 64 ℃， and solid-liquid ratio of 1∶16. The results showed that P. oleracea extract significantly reduced the release of NO， TNF-α， and IL-6 in LPS-induced RAW264.7 inflammatory cells. Meanwhile， it also significantly alleviated the degree of xylene-induced ear edema in mice. Conclusion In this study， the optimal ultrasonic extraction process of the anti-inflammatory ingredient from P. oleracea was determined， which laid a foundation for the development and application of the anti-inflammatory ingredients from this plant.

Graphical abstract

关键词

马齿苋 / 提取工艺 / 单因素实验 / 响应面法 / 抗炎活性

Key words

Portulaca oleracea L. / extraction process / single factor test / response surface methodology / anti-inflammatory

马齿苋（Portulaca oleracea L.）作为一种分布较广泛的药食同源植物，属于马齿苋科马齿苋属植物，全草供药用，具有清热利湿、解毒消肿、消炎、止渴、利尿等作用^［1-3］。马齿苋含有多种化学成分，其中包括生物碱类、黄酮类、萜类、香豆素类、有机酸类、多糖以及挥发油等^［4-6］。现代医学研究发现，马齿苋具有抑菌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、抗疟疾及调节免疫等药理作用^［7-10］。

炎症是机体对外界有毒有害物质刺激产生的一种免疫应答反应，是组织器官自我保护的生理反应。虽然炎症是机体的一种防御性反应，但是过度的炎症则可能引发休克和多器官功能损伤^［11］。历代医家和民间医生均知晓马齿苋具有清热解毒和消炎的作用。《本草纲目》言其“散血消肿，利肠滑胎，解毒通淋”，《新修本草》曰其“主诸肿瘘疣目，诸淋，金疮血流”。现代研究也发现，马齿苋对多种炎症细胞和动物模型具有抗炎作用。BABASHPOUR S等^［12］研究发现，马齿苋提取物通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞中iNOS和TNF-α mRNA的表达水平在大鼠小胶质细胞中发挥抗炎作用。王国玉等^［13］研究发现，马齿苋水提取物（20、10、5 g·kg^-1）呈剂量依赖性缓解由二甲苯诱导的小鼠耳肿胀，具有明显的抗炎消肿作用。

目前，对马齿苋成分提取工艺的研究主要集中于马齿苋总生物碱^［14-15］、总多酚^［16］、总黄酮^［17-18］的提取工艺研究以及正交法提取多糖^［19］的工艺研究。运用响应面法对马齿苋抗炎成分进行提取工艺优化的研究报道较少。因此，本研究在考察单因素条件的基础上，采用响应面中的Box-Behnken方法，进行四因素三水平实验设计，采用脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）诱导的RAW264.7细胞炎症模型，以NO含量为评价指标，对马齿苋抗炎成分的提取工艺进行优化。通过测定NO、TNF-α和IL-6的含量验证马齿苋提取物的体外抗炎活性。并通过测定小鼠耳肿胀度验证马齿苋提取物的体内抗炎活性。为综合利用马齿苋提供科学依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器

BJ-800A型拜杰多功能粉碎机（永康市铂欧五金制品有限公司）；AS 220.X2型电子天平（苏州培科实验仪器科技有限公司）；R213B型旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；SHZ-Ⅲ A型真空泵循环水式多用真空泵（西安莫吉娜仪器制造有限公司）；博纳HH-6型恒温水浴锅（杭州旌斐仪器科技有限公司）；KQ5200DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；3111型二氧化碳培养箱、Protect-2F0-S型细胞超净台［赛默飞世尔科技（中国）有限公司］；UMR-9600型全自动酶标仪（杭州优米仪器有限公司）。

1.2 试药

一氧化氮（NO）检测试剂盒、脂多糖（lipopolysaccharide， LPS），均购自碧云天生物技术有限公司；小鼠肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）ELISA试剂盒（江苏晶美生物工程有限公司）；小鼠白细胞介素6（interleukin-6， IL-6）ELISA试剂盒（江苏晶美生物工程有限公司）；胎牛血清［赛澳美细胞技术（北京）有限公司］；DMEM培养基、PBS缓冲液，均购自西安永胜兴成生物科技有限公司；地塞米松（上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；纯净水（杭州娃哈哈基团有限公司）；其他试剂均为分析纯。

马齿苋于2023年8月购自安徽亳州中药材市场，经西安交通大学药学院周涛副教授鉴定为马齿苋科马齿苋属植物马齿苋（Portulaca oleracea L.）的干燥地上部分。

1.3 实验动物

SPF级昆明种小鼠，体质量为18~22 g，购自西安交通大学实验动物中心，动物生产许可证号：SCXK（陕）2023-002。动物饲养于温度22~25 ℃，相对湿度为50%~70%的环境中，自由摄食和饮水。本研究经西安交通大学实验动物伦理委员会审核、批准。

1.4 细胞

小鼠巨噬细胞系RAW264.7（细胞株编号：nobcell0157），购自浙江诺博生物制品有限公司。

2 方法

2.1 炎症细胞模型的构建

将处于对数生长期的RAW264.7细胞，以5×10⁵个·mL^-1的密度接种至含有DMEM培养基（含10%热灭活胎牛血清及100 U·mL^-1青霉素、链霉素）的96孔细胞板中，每孔100 µL，置于37 ℃、含有5% CO₂的培养箱中培养24 h后，每孔加入100 µL含有完全培养基的LPS溶液，使其终质量浓度为1 μg·mL^-1，刺激24 h。

2.2 抗炎活性的测定

对文献^［20-23］中的方法进行优化，进行抗炎活性测定。实验分为对照组（200 µL完全培养基）、模型组（100 µL含1 μg·mL^-1的LPS完全培养基+100 µL完全培养基）、阳性对照组（100 µL质量浓度为500 µg·mL^-1的地塞米松+100 µL终质量浓度为1 µg·mL^-1的LPS完全培养基）、药物组（100 µL质量浓度为500 μg·mL^-1的马齿苋提取物+100 uL终质量浓度为1 µg·mL^-1的LPS完全培养基），每组设置5个复孔。将96孔板置于37 ℃，5% CO₂培养箱中培养24 h后，吸取培养基上清液50 µL，用NO检测试剂盒测定波长540 nm处的吸光度，计算各孔中NO的含量。

2.3 单因素实验

将干燥的马齿苋药材粉碎，过40目筛，备用。取约1.0 g粉末，精密称定，在不同的条件下进行提取。以NO含量为参考响应值，在超声提取功率为200 W的条件下，测定不同乙醇体积分数（70%、75%、80%、85%、90%）、超声时间（30、40、50、60、70 min）、超声温度（30、40、50、60、70 ℃）、料液比（1∶5、1∶10、1∶15、1∶20、1∶25）对马齿苋抗炎成分提取的影响。

2.3.1 乙醇体积分数的考察

取马齿苋粉末约1.0 g，精密称定，置于干燥的250 mL圆底烧瓶中，加入不同体积分数（70%、75%、80%、85%、90%）的乙醇15 mL，在提取温度50 ℃下，超声提取50 min，考察不同乙醇体积分数对马齿苋抗炎成分提取的影响。

2.3.2 提取时间的考察

取马齿苋粉末约1.0 g，精密称定，置于干燥的250 mL圆底烧瓶中，加入体积分数85%的乙醇15 mL，在提取温度50 ℃下，超声提取30、40、50、60、70 min，考察不同超声时间对马齿苋抗炎成分提取的影响。

2.3.3 提取温度的考察

取马齿苋粉末约1.0 g，精密称定，置于干燥的250 mL圆底烧瓶中，加入体积分数85%的乙醇15 mL，超声提取60 min，提取温度为30、40、50、60、70 ℃，考察不同超声温度对马齿苋抗炎成分提取的影响。

2.3.4 料液比的考察

取马齿苋粉末约1.0 g，精密称定，置于干燥的250 mL圆底烧瓶中，加入不同量（5、10、15、20、25 mL）的体积分数85%乙醇，在提取温度50 ℃下，超声提取60 min，考察不同料液比对马齿苋抗炎成分提取的影响。

2.4 响应面法优化实验

在单因素实验结果的基础上，设计响应面法优化实验，自变量为乙醇体积分数（A）、提取时间（B）、提取温度（C）和料液比（D），响应值为NO的含量，运用Design Expert 13软件，采用Box-Benhnken方法设计四因素三水平实验，以得到最佳提取工艺，实验的因素水平见表1。

2.5 体外抗炎作用的研究

2.5.1 马齿苋提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞NO释放的影响

取处于对数生长期的RAW264.7细胞，使用完全培养基重悬细胞，以5×10⁵个·mL^-1的密度接种细胞至96孔板中，置于37 ℃、5% CO₂培养箱中过夜培养。实验分为对照组、模型组、加药组。加药组分别加入不同质量浓度的马齿苋提取物（250、500 μg·mL^-1，1 mg·mL^-1），接着加入LPS（1 mg·mL^-1）共孵育24 h。24 h后按照NO检测试剂盒的说明书进行操作，检测540 nm波长处的吸光度（A），计算各孔培养基上清中NO的含量。

2.5.2 马齿苋提取物对LPS诱导RAW264.7细胞TNF-α、IL-6炎症因子释放的影响

细胞分组及处理同“2.2”项下方法。按照酶联免疫吸附试验试剂盒的说明书，用酶标仪测定各孔的A值，计算各组细胞中TNF-α、IL-6的含量。

2.6 体内抗炎作用的研究

对文献^［24-27］中的方法进行优化，进行二甲苯所致小鼠耳肿胀实验。基于响应面法优化的最优提取工艺制备马齿苋抗炎提取物，验证其对二甲苯致小鼠耳肿胀的体内抗炎活性。取雄性SPF级昆明种小鼠30只，随机分为生理盐水组（20 mg·kg^-1），地塞米松组（3 mg·kg^-1），马齿苋提取物低、中、高剂量组（2、4、8 g·kg^-1），每组6只。各组小鼠每日灌胃给药0.2 mL，每日1次，连续处理7 d。末次给药后30 min，各组小鼠右耳廓内外两面均匀涂抹0.05 mL二甲苯致炎，其左耳不做处理。45 min后，脱颈椎处死小鼠，用手术剪剪下左右两耳廓，用内径6 mm的打孔器在同一部位凿取两圆耳片，分别在电子分析天平上精确称取质量，计算耳肿胀度（mg）及耳肿胀抑制率（%）。耳肿胀度（mg）＝右耳片质量－左耳片质量。耳肿胀抑制率（%）＝［（生理盐水组平均耳肿胀度－给药组平均耳肿胀度）/生理盐水组平均耳肿胀度］×100%。

2.7 统计学方法

Box-Behnken设计采用Design-Expert Software 13.0软件对响应面实验数据进行二项多次回归拟合方差分析。使用GraphPad Prism 9.5软件对数据进行处理，数据以（\overline{x}±s）表示，多组间比较采用单因素方差分析（One-Way ANOVA）。 P<0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 单因素实验的结果

3.1.1 乙醇体积分数对马齿苋抗炎成分提取的影响

当乙醇体积分数为85%时，NO含量（3.93 µmol·L^-1）在所测试的乙醇体积分数中最低，表明抗炎效果最好，且强于阳性对照地塞米松（6.27 µmol·L^-1）（见图1a）。因此，选择乙醇体积分数80%、85%、90%进行响应面实验。

3.1.2 超声时间对马齿苋抗炎成分提取的影响

当超声时间为60 min时，NO含量（1.76 µmol·L^-1）在所测试的时间中最低，表明抗炎效果最好，且显著低于阳性对照地塞米松（6.27 µmol·L^-1）。分析原因可能是：当超声时间达到70 min时，会破坏马齿苋主要抗炎成分的稳定性，从而使得抗炎效果有所下降（见图1b）。因此，选择超声时间50、60、70 min进行响应面实验。

3.1.3 超声温度对马齿苋抗炎成分提取的影响

随着超声温度的升高，NO的含量随之降低，当超声温度达到70 ℃时，NO含量（2.38 µmol·L^-1）在所测试的温度中最低，表明抗炎效果最好，且优于阳性对照地塞米松（6.27 µmol·L^-1）。表明在合适的范围内提高超声温度，不会破坏马齿苋主要抗炎成分的稳定性，反而能够使得抗炎成分的溶出增加（见图1c）。因此，选择超声温度50、60、70 ℃进行响应面实验。

3.1.4 料液比对马齿苋抗炎成分提取的影响

NO含量会随着料液比的升高而降低。当料液比为1∶15时，NO含量（1.98 µmol·L^-1）在所测料液比中最低，表明抗炎效果最好，且优于阳性对照地塞米松（6.27 µmol·L^-1）。这可能是由于过大的溶剂与溶质之间的浓度差，影响了马齿苋抗炎成分在溶剂中的溶解度（见图1d）。因此，选择料液比1∶10、1∶15、1∶20进行响应面实验。

3.2 响应面实验的结果

3.2.1 响应面实验设计及结果

通过对上述四因素（乙醇体积分数、提取时间、提取温度、料液比）提取条件范围的确定，基于Box-Behnken设计方法进行响应面实验，见表2。

用Design Expert 13.0软件对实验结果进行多项式拟合回归，得到NO含量实测值与乙醇体积分数（A）、提取时间（B）、提取温度（C）和料液比（D）因素之间的二次多项回归方程：y=0.991 2-0.342 6A+0.040 8B-0.096 3C+0.227 7D-0.322 2AB-0.627 7AC-0.277 8AD+0.011 0BC+0.055 7BD-0.661 0CD+0.677 7A²+0.063 6B²+0.774 7C²+0.894 3D²。

回归模型及方差分析结果见表3。由表3可知，回归模型的显著性水平P<0.01，表明该回归模型具有极高的显著性，模型成立；失拟误差P=0.15>0.05，差异不显著，表明误差极小；决定系数R²=0.943 5，表明该模型能解释94.35%响应值的变化；R²_adj=0.89，表明该回归方程拟合情况较好，建立的回归模型可以较好地描述各因素与响应值之间的关系，能够拟合真实的实验结果，可用于指导马齿苋抗炎成分的提取。并且一次项A、D，交互项AC、CD，二次项A²、C²和D²的差异均极显著；交互项AB、AD差异显著。各因素的主效应关系为：A>D>C>B，即乙醇体积分数>料液比>提取温度>提取时间。四因素的相互作用对NO含量的响应面趋势见图5~图10。

3.2.2 各因素交互作用对马齿苋抗炎成分提取的影响

乙醇体积分数的曲线最为陡峭，因此乙醇体积分数对马齿苋抗炎成分提取的影响最为显著，其次是料液比、提取温度、提取时间。见图2。经实验确定提取的理论最佳条件为：乙醇体积分数为86.85%，提取时间为61.19 min，提取温度为63.57 ℃，料液比为1∶15.94。结合实际情况，将最佳条件调整为：乙醇体积分数为87%，提取时间为61 min，提取温度为64 ℃，料液比为1∶16。在此条件下进行3次平行验证实验，得到NO含量平均实测值为0.87 µmol·L^-1，与预测值（0.81 µmol·L^-1）比较差异无统计学意义，表明通过单因素-响应面优化法建立的模型是有效、可行的，可用于指导马齿苋抗炎成分的提取。

3.3 马齿苋提取物体外抗炎作用研究的结果

3.3.1 马齿苋提取物对LPS诱导的RAW264.7释放NO的影响

与对照组比较，模型组的NO释放量显著升高（P<0.01），表明RAW264.7细胞炎症模型构建成功。与LPS模型组比较，马齿苋提取物低、中、高剂量组的NO释放量显著减低（P<0.01），表明马齿苋提取物能显著降低细胞NO的释放量。见图3。

3.3.2 马齿苋提取物对LPS诱导的RAW264.7细胞TNF-α、IL-6炎症因子释放的影响

与对照组比较，模型组的TNF-α、IL-6炎症因子的分泌量显著增加，表明RAW264.7细胞炎症模型构建成功。与模型组比较，马齿苋提取物低、中、高质量浓度组TNF-α、IL-6炎症因子的分泌量均显著降低（P<0.01），表明马齿苋提取物能抑制炎症巨噬细胞TNF-α、IL-6炎症因子的分泌。见图4。

3.4 马齿苋提取物体内抗炎作用研究结果

3.4.1 马齿苋提取物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响

与生理盐水组比较，阳性对照组和马齿苋提取物各剂量组小鼠的耳肿胀均被明显抑制（P<0.05，P<0.01）。其中阳性对照组小鼠的耳肿胀程度最轻，其肿胀抑制率为60.15% （P<0.01），马齿苋提取物的耳肿胀抑制率呈剂量依赖性升高，低剂量组为36.79% （P<0.01）、中剂量组为44.21% （P<0.01）、高剂量组为51.99% （P<0.05）。见表4。

4 讨论

本研究围绕马齿苋抗炎成分提取展开系统探究，首先通过单因素实验研究4个主要因素（乙醇体积分数、提取时间、提取温度和料液比）对马齿苋抗炎成分提取的影响；然后通过响应面法中的Box-Behnken进行三水平四因素组配实验设计，得到马齿苋抗炎成分的最佳提取工艺条件：乙醇体积分数为87%，提取时间为61 min，提取温度为64 ℃，料液比为1∶16。为验证该工艺下提取物的抗炎效果，在细胞水平，以LPS诱导的RAW264.7细胞作为炎症模型，结果显示，马齿苋提取物能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的释放以及TNF-α、IL-6炎症因子的分泌；二甲苯致耳肿胀实验结果表明，与生理盐水组比较，马齿苋各剂量组小鼠的耳肿胀均缓解（P<0.05），且呈剂量依赖性。

马齿苋作为一种药食同源的植物药，在抗炎、抗菌、抗肿瘤、调节血糖与血脂水平等方面应用广泛。目前针对马齿苋抗炎成分的提取工艺优化研究相对匮乏，本研究通过系统探究其抗炎成分的提取工艺，可为马齿苋抗炎提取物的开发和应用奠定基础，为马齿苋在抗炎作用方面的开发应用提供技术参考，有助于深入了解马齿苋在抗炎方面的药用潜力，可能为治疗炎症相关疾病提供新的天然药物来源。

参考文献

[1] 唐凯俊.马齿苋的化学成分及其活性研究［D］.济南：山东大学，2022．

[2] 林叶.马齿苋的生理活性及应用研究进展［J］.福建轻纺，2024，（12）：42-46．

[3] LIN Ye.Progress in research on the physiological activity and applications of Purslane ［J］.The Light & Textile Industries of Fujian，2024，（12）：42-46．

[4] 吴晓红，高生平.马齿苋中活性成分及其药理作用的研究进展［J］.安徽农业科学，2023，51（10）：21-24．

[5] WU Xiaohong， GAO Shengping.Research progress on active components and pharmacological effects of purslane［J］. Journal of Anhui Agricultural Sciences，2023，51（10）：21-24．

[6] SONG M， YING Z， YING X，et al.Three novel alkaloids from Portulaca oleracea L.and their anti-inflammatory bioactivities［J］. Fitoterapia，2022，156：105087．

[7] YAO J， WANG L， LIU P，et al.A new alkaloid from Portulaca oleracea L. with its anti-inflammatory activity［J］. Z Für Naturforschung C，2023，78（11/12）：409-413．

[8] 赵阳，卢育新，程晓晨，等.马齿苋中化学成分及其抗炎活性研究［J］.国际药学研究杂志，2020，47（11）：995-1000．

[9] ZHAO Yang， LU Yuxin， CHENG Xiaochen，et al.The chemical constituents of Portulaca oleracea L.and their anti-inflammation activity［J］.Journal of International Pharmaceutical Research，2020，47（11）：995-1000．

[10] GHORANI V， SAADAT S， KHAZDAIR M R，et al ．Phytochemical characteristics and anti-inflammatory，immunoregulatory，and antioxidant effects of Portulaca oleracea L.：A comprehensive review［J］. Evid Based Complementary Altern Med，2023，2023（1）：2075444．

[11] 王绍展，朱青霞，陈井霞，等.异欧前胡素通过NF-κB和JAK1/STAT1信号通路抑制巨噬细胞M1极化发挥抗炎镇痛作用［J］.中南药学，2023，21（8）：1985-1990．

[12] WANG Shaozhan， ZHU Qingxia， CHEN Jingxia，et al ．Anti-inflammation and analgesic effect of isoimperatorin on the polarization of macrophage M1 via NF-κB and JAK1/STAT1 signaling pathway［J］.Central South Pharmacy，2023，21（8）：1985-1990．

[13] 张子越，殷斌，连锐锐，等.基于网络药理学探究马齿苋缓解结肠炎的作用机制［J］.世界中医药，2020，15（24）：3748-3760．

[14] ZHANG Ziyue， YIN Bin， LIAN Ruirui，et al.Anti-colitis mechanism of herba portulacae based on network pharmacology［J］. World Chinese Medicine，2020，15（24）：3748-3760．

[15] 王坦.马齿苋总黄酮对慢性前列腺炎模型的药效机制研究［D］.郑州：河南中医药大学，2017．

[16] MEDZHITOV R.The spectrum of inflammatory responses［J］. Science，2021，374（6571）：1070-1075．

[17] BABASHPOUR S， PIRI K， SABOUNI F，et al.Anti-inflammatory properties of extract of the hairy root of native Portulaca Oleracea L.and its effect on some inflammatory genes expression in rat microglial cells［J］.Iran J Biotechnol，2023，21（3）：e3249．

[18] 王国玉，王璐，王玮，等.马齿苋水提取物抗炎作用研究［J］.河北医学，2014，20（11）：1866-1868．

[19] WANG Guoyu， WANG Lu， WANG Wei，et al.Anti-inflammatory effect of water extract of Portulaca oleracea L［J］. Hebei Medicine，2014，20（11）：1866-1868．

[20] 梁艳妮，李若岚，唐志书，等.响应曲面法优化马齿苋中总生物碱的提取工艺［J］.中国现代中药，2019，21（3）：342-346，364．

[21] LIANG Yanni， LI Ruolan， TANG Zhishu，et al ．Optimization of extracting total alkaloids from Portulaca oleracea L.by response surface methodology［J］. Modern Chinese Medicine，2019，21（3）：342-346，364．

[22] 王亚冬，李秀梅，潘方方，等.两种药食同源植物总生物碱的提取及其抗氧化作用［J］.食品研究与开发，2020，41（5）：73-80．

[23] WANG Yadong， LI Xiumei， PAN Fangfang，et al ．Comparison of the extraction conditions and the antioxidant effects of total alkaloids of two kinds of medicinal and edible plants［J］.Food Research and Development，2020，41（5）：73-80．

[24] 祝媛媛，任晓聪，刘元松，等.响应面法优化马齿苋总多酚提取工艺及其抗氧化活性分析［J］.粮食与油脂，2024，37（4）：119-123．

[25] ZHU Yuanyuan， REN Xiaocong， LIU Yuansong，et al ．Optimization of total polyphenols extraction process from Portulaca oleracea L.by response surface method and analysis of its antioxidant activity［J］.Cereals & Oils，2024，37（4）：119-123．

[26] LIU Z T， ZHANG Y， ZHANG X J，et al.Optimization of ultrasound-assisted extraction of flavonoids from Portulaca oleracea L.，the extraction kinetics and bioactivity of the extract［J］.J Appl Res Med Aromat Plants，2023，37：100512．

[27] WANG C， LI Y， YAO L，et al. Optimization of ultrasonic-assisted extraction of flavonoid from Portulaca oleracea L. by response surface methodology and chemical composition analysis［J］. J Korean Soc Appl Biol Chem，2014，57（5）：647-653．

[28] 杨电增，邹兰兰，钱志伟.马齿苋多糖双酶法提取工艺优化及其抗氧化性研究［J］.保鲜与加工，2021，21（2）：88-93．

[29] YANG Dianzeng， ZOU Lanlan， QIAN Zhiwei.Study on optimization of dual-enzymatic extraction of polysaccharides from Portulaca oleracea and their antioxidant activity［J］. Storage and Process，2021，21（2）：88-93．

[30] 唐代萍，付磊，王成，等.Box-Behnken设计-响应面法优化新疆赤芍的酒炙工艺［J］.西北药学杂志，2025，40（3）：120-125．

[31] TANG Daiping， FU Lei， WANG Cheng，et al ．Optimization of the wine-processing technology of Paeonia sinjiangensis K.Y.Pan Radix based on Box-Behnken design-response surface methodology［J］.Northwest Pharmaceutical Journal，2025，40（3）：120-125．

[32] 刘哲佟，吴清清，辛赛赛，等.青蒿抗炎部位提取工艺的优化［J］.西北药学杂志，2025，40（2）：16-21．

[33] LIU Zhetong， WU Qingqing， XIN Saisai，et al ．Optimization of the extraction process of anti-inflammatory part from Artemisia caruifolia Buch.-Ham．ex Roxb［J］. Northwest Pharmaceutical Journal，2025，40（2）：16-21．

[34] 王慧颖，刘燕飞，张敬远，等.响应面法优化龙须菜多糖快速溶剂萃取提取工艺及其抗炎活性研究［J］.食品工业科技，2023，44（23）：110-117．

[35] WANG Huiying， LIU Yanfei， ZHANG Jingyuan，et al ．Optimization of accelerated solvent extraction of polysaccharides from Gracilaria lemaneiformis using response surface methodology and anti-inflammatory activity［J］.Science and Technology of Food Industry，2023，44（23）：110-117．

[36] 祁金丽，梁洁，刘婷婷，等.响应面法优化荔枝叶成分提取工艺及其抗炎作用研究［J］.饲料研究，2023，46（19）：73-80．

[37] QI Jinli， LIANG Jie， LIU Tingting，et al.Optimization of extraction technology and anti-inflammatory effect of Litchi chinensis Sonn leaves component by response surface method［J］. Feed Research，2023，46（19）：73-80．

[38] 吕萍.响应面优化长白山紫苏籽油制备及其抗炎活性研究［J］.食品研究与开发，2022，43（9）：96-102．

[39] Ping LÜ.Preparation and anti-inflammatory activity of Perilla seed oil from Changbai Mountain by response surface optimization［J］. Food Research and Development，2022，43（9）：96-102．

[40] 高剑，孙焕然，国洪宾，等.响应面法优化紫叶李皮中总多酚的提取工艺及其抗炎活性［J］.河北大学学报：自然科学版，2020，40（2）：161-170．

[41] GAO Jian， SUN Huanran， GUO Hongbin，et al ．Extraction technology optimization of total polyphenols from Prunus cerasifera by response surface methodology and corresponding anti-inflammatory activity investigation［J］. Journal of Hebei University：Natural Science Edition，2020，40（2）：161-170．

[42] 袁琴，李曼，张露蓉.白花蛇舌草鲜品水提液和醇提液的抗炎作用研究［J］.抗感染药学，2024，21（6）：559-563．

[43] YUAN Qin， LI Man， ZHANG Lurong. Research on anti-inflammatory effects of the fresh Oldenlandia diffusa water extract and alcohol Extract*1［J］.Anti-Infection Pharmacy，2024，21（6）：559-563．

[44] 赵蕊，吴桐，陈昭，等.马齿苋多糖对小鼠抗炎及镇痛作用的实验研究［J］.黑龙江八一农垦大学学报，2017，29（5）：28-32．

[45] ZHAO Rui， WU Tong， CHEN Zhao，et al.Anti-inflammatory and analgesic study of Portulaca oleracea L.polysaccharide on mice［J］.Journal of Heilongjiang Bayi Agricultural University，2017，29（5）：28-32．

基金资助

陕西省重点研发计划项目(2024SF-ZDCYL-03-18)

2025—2026陕西省中医药科研项目(SZY-KJCYC-2025-JC-046)

青蒿和山萮菜开发技术服务项目(HXDSH20241181)