金荞麦扶正胶囊提取工艺及质量标准的研究

Research on the extraction process and quality standard of Jinqiaomai Fuzheng Capsules

摘要

目的 优化金荞麦扶正胶囊的提取工艺，建立科学可行的质量控制标准，为该制剂的生产质量监管提供参考。 方法 以栀子苷含量为主要评价指标，采用单因素考察法筛选提取工艺的关键影响因素，结合正交实验优化提取参数。采用薄层色谱法（thin-layer chromatography，TLC）对金荞麦扶正胶囊中的金荞麦、黄芪、栀子和地骨皮进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography，HPLC）测定栀子苷的含量，按照《中华人民共和国药典》（2020年版）四部通则0832第二法和0921胶囊剂崩解时限检查法测定水分和崩解时限。 结果 金荞麦扶正胶囊的最佳提取工艺为采用10倍量水，煎煮3次，每次2 h，将提取液浓缩至相对密度为1.15~1.20（60 ℃）的稠膏；TLC鉴别结果显示，金荞麦、黄芪、栀子和地骨皮的特征斑点清晰，分离度良好，阴性对照无干扰；3批样品水分含量为5.04%~5.08%，崩解时限均≤30 min，符合《中华人民共和国药典》中的规定；HPLC测定结果显示，栀子苷在10.0~320.0 μg·mL^-1范围内线性关系良好，加样回收率为98.5%~100.0%，相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为0.57%（n=6），精密度、稳定性、重复性实验的RSD均<2%；制订质量限度为每粒胶囊中栀子苷含量不得少于1.2 mg。 结论 优化后的提取工艺稳定可行，建立的质量标准重复性好、专属性强，可用于金荞麦扶正胶囊的生产过程控制与成品质量评价。

Abstract

Objective To optimize the extraction process of Jinqiaomai Fuzheng Capsules， establish a scientific and feasible quality control standard， and provide a reference for the production quality supervision of this preparation. Methods Taking the content of geniposide as the main evaluation index， the key influencing factors of the extraction process were screened by the single factor test， and the extraction parameters were optimized combined with the orthogonal test. Thin-layer chromatography （TLC） was used to identify Fagopyri dibotryis Rhizoma， Astragali Radix， Gardeniae Fructus and Lycii Cortex， and high-performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the content of geniposide in Jinqiaomai Fuzheng Capsules. Moisture and disintegration time were measured in accordance with Method 2 of the General Rule 0832 and the Capsule Disintegration Limit Test （General Rule 0921） from Part Ⅳ of the Pharmacopoeia of the People’s Republic of China （2020 Edition）. Results The optimal extraction conditions of Jinqiaomai Fuzheng Capsules were as follows： using 10 times the amount of water to extract 3 times， each time 2 hours， concentrating the extract to the relative density of thick paste about 1.15-1.20 （60 ℃）. The TLC spots of Fagopyri dibotryis Rhizoma， Astragali Radix， Gardeniae Fructus and Lycii Cortex were clear without interference. The moisture determination results of 3 batches of samples were ranged from 5.04% to 5.08%， and the disintegration time was within 30 minutes which were in compliance with completed with the pharmacopoeia regulations. Geniposide showed good linearity within the range of 10.0-320.0 μg·mL^-1. The sample recovery rate was 98.5% to 100.0% with a relative standard deviation （RSD） of 0.57% （n=6）. The RSDs of precision， stability and repeatability were all less than 2%. The content limit of geniposide not less than 1.2 mg in each capsule was set up. Conclusion The established extraction process and quality standard method have good repeatability and strong specialization， and can be used to control the production quality of Jinqiaomai Fuzheng Capsules.

Graphical abstract

关键词

金荞麦扶正胶囊 / 栀子苷 / 提取工艺优化 / 质量标准 / 薄层色谱法 / 高效液相色谱法

Key words

Jinqiaomai Fuzheng Capsules / geniposide / optimization of extraction process / quality standard / thin-layer chromatography / high-performance liquid chromatography

金荞麦扶正方由金荞麦、黄芪、栀子、地骨皮4味药材配伍组成，具有清热解毒、排脓祛瘀的功效，临床常用于瘟毒侵袭、邪热壅肺、热入营阴证的治疗。胶囊剂作为临床常用剂型，兼具外观光洁美观、能有效掩盖方剂苦味的特点，且具有生物利用度高、辅料用量少的优势；与片剂、丸剂相比，其制备过程无需添加黏合剂、不施加压力，在胃肠道中崩解迅速、吸收良好、起效快，同时胶囊壳可保护药物免受湿气、氧气及光线的影响，显著提升制剂的稳定性^［1］。

鉴于传统汤剂存在携带不便、易霉变变质、难以实现规模化生产等缺点^［2］，为满足临床用药需求，课题组按照国家食品药品监督管理局颁布的《医疗机构制剂注册管理办法》及广西壮族自治区实施细则，将金荞麦扶正方开发为金荞麦扶正胶囊。中药复方提取工艺的优化是制剂开发的关键环节，适宜的实验设计方案是保障有效成分充分提取、保证新药生产质量稳定均一的关键。目前，优化中药提取工艺的常用方法包括正交设计、星点设计、响应面设计、因子设计等^［3-7］，其中正交设计法可通过较少批次实验探究多因素间的交互作用，适用于因素水平较少的工艺筛选，具有高效、快速、经济等特点，被广泛应用于中药制剂工艺优化研究^［8］。本研究采用正交设计实验优化金荞麦扶正胶囊的提取工艺，并结合薄层色谱法（thin-layer chromatography，TLC）与高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography，HPLC）建立其质量控制标准，以期为金荞麦扶正胶囊的产业化发展提供理论依据与技术支撑。

1 仪器与试药

1.1 仪器

YJDJ08型常温常压煎药机（长沙卓成医疗器械有限公司）；HH-S型恒温水浴锅（江苏金坛市医疗仪器厂）；ZF-Ⅱ型紫外分析仪（上海左乐仪器有限公司）；松下DMC-LX100型相机（厦门松下电子有限公司）；KQ-100型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AL-104型万分之一电子天平［梅特勒-托利多（上海）有限公司］；YP10002型十分之一电子天平（余姚市金诺天平仪器有限公司）；1525-2707-2489-242型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；UPR-Ⅱ-20TN型优普系列超纯水机（四川优普超纯科技有限公司）。

1.2 试药

金荞麦（批号1114-200001）、黄芪（批号121462-201304）、栀子（批号120986-200303）、地骨皮（批号1087-9901）对照药材，黄芪甲苷（批号110781-200512，质量分数为96.2%）、栀子苷（批号110749-201617，质量分数为98.1%）对照品，均购自中国食品药品检定研究院；金荞麦（批号160401）、黄芪（批号160515）、栀子（批号161121）、地骨皮（批号160421），均购于广西新鸿森药业有限责任公司；金荞麦扶正胶囊（批号170601、170602、170603）、缺金荞麦阴性样品、缺黄芪阴性样品、缺栀子阴性样品、缺地骨皮阴性样品，均由广西中医药研究院提供。

2 方法与结果

2.1 提取工艺的研究

2.1.1 提取方法与正交实验设计

本品源自医疗机构协定处方，原用法为水煎服，故采用水提工艺。通过预实验筛选出影响水提效果的4个主要因素：浸泡时间（A）、提取溶剂量（B）、提取次数（C）、提取时间（D）。各因素设置3个水平，浸泡时间为0、0.5、1.0 h；提取溶剂量为药材质量的8、10、12倍；提取次数为1、2、3次；提取时间为1.0、1.5、2.0 h。采用L₉（3⁴）正交实验表进行正交实验，因素水平见表1。正交实验结果及方差分析见表2、表3。

方差分析结果显示，提取次数（C）对栀子苷提取量具有显著性影响（P<0.05），浸泡时间（A）、提取溶剂量（B）、提取时间（D）对栀子苷提取量无显著性影响（P>0.05）。由极差R值可知，各因素影响程度排序依次为R_C>R_D>R_B>R_A，即提取次数是核心影响因素，提取时间和提取溶剂量是次要影响因素，浸泡时间的影响最小。

结合正交实验K值与实际生产可行性分析可知，浸泡时间0.5 h的K值略高，但与0、1 h比较差异较小，为简化工艺选定浸泡时间为0 h；12倍量水的K值略高于10倍量，但差异不大，为降低生产成本选定10倍量水。最终确定最佳提取工艺为药材不浸泡，加10倍量水提取3次，每次2 h。

2.1.2 工艺验证实验

按处方量的1/10称取药材，采用最佳工艺进行3次平行验证实验，测定栀子苷含量。结果显示，3次验证实验的栀子苷含量分别为271.8、276.1、271.6 mg·100粒^-1，均值为273.2 mg·100粒^-1，与正交实验中栀子苷含量最高组（283.7 mg·100粒^-1）接近，表明优选的工艺稳定、可靠。

2.1.3 稠膏浓缩工艺与相对密度的确定

取2个处方量药材，按照最佳工艺水煎提取，将提取液浓缩至不同相对密度（60 ℃）的稠膏，分别平铺于面积相同的烘盘中，于60 ℃条件下干燥，明确稠膏的浓缩程度，考察浓缩时间、干燥时间及干膏收率。见表4。结果表明，相对密度为1.10的稠膏过于稀薄，干燥时间过长；相对密度为1.25的稠膏浓缩时间较长，且易黏附浓缩器内壁导致收膏率降低；相对密度为1.15和1.20（60 ℃）的稠膏，其浓缩与干燥总时间适中，干膏收率稳定，故选定相对密度范围为1.15~1.20（60 ℃）作为稠膏浓缩标准。

2.1.4 阻湿剂用量考察

由于本方样品中的大量浸膏易吸潮结块，故成型时需考虑加入适量的阻湿剂。目前，中药制剂最经济实用的阻湿剂为淀粉，因此，本研究选择淀粉作为阻湿剂。取相对密度1.15~1.20（60 ℃）的干膏粉5份，每份10 g，按照干膏量的0、10%、20%、30%、40%加入淀粉作为阻湿剂。取各组药粉约2 g，置于敞口量瓶中，在温度（40 ±2） ℃，相对湿度（75%±2%）条件下放置24 h，测定吸湿率。吸湿率=［（放置后总质量－原总质量）/原总质量］×100%，见表5。结果显示，随着淀粉添加量增加，药粉吸湿率逐渐降低；当淀粉添加量达到20%后，继续增加用量，吸湿率降低幅度不明显。综合考虑吸湿效果与制剂成型性，选定淀粉添加量为干膏量的20%作为阻湿剂用量标准。

2.2 TLC鉴别

2.2.1 金荞麦的TLC鉴别

取本品内容物3 g，加体积分数70%乙醇50 mL，加热回流1 h，过滤，滤液蒸干，残渣加水20 mL溶解，过滤，滤液加入聚酰胺柱（2 g，100~200目，湿法装柱，内径为1.5 cm），水洗至流出液澄清，再用体积分数为95%的乙醇60 mL洗脱，收集洗脱液蒸干。残渣加水溶解后，过滤，滤液依次用石油醚萃取2次，每次20 mL，弃去石油醚；正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液；用质量分数5%碳酸氢钠萃取2次，每次20 mL，合并5%碳酸氢钠萃取液。用稀盐酸调节pH值为2~3，再用正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液，蒸干，残渣加水20 mL溶解，过滤，滤液再次上聚酰胺柱，先用大量的水冲洗至流出液澄清，用乙酸乙酯-甲醇（9∶1、7∶3）梯度洗脱，收集乙酸乙酯-甲醇（7∶3）洗脱液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取金荞麦对照药材2 g，同法制备对照药材溶液；按照处方工艺制备缺金荞麦的阴性样品溶液。

按照《中华人民共和国药典》（以下简称《中国药典》）（2020年版）四部通则0502薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各5~10 μL，对照药材溶液3~5 μL，点于同一聚酰胺薄层板上，以体积分数为95%的乙醇-丙酮-冰醋酸（5∶5∶3）为展开剂，展开、晾干，喷质量分数为3%的三氯化铝试液，热风加热1 min。置于紫外光灯（365 nm）下检视。

结果显示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰。对3批样品（批号170601、170602、170603）的鉴别实验表明，该方法的重复性好、专属性强。见图1。

2.2.2 黄芪的TLC鉴别

取本品内容物3 g，加甲醇20 mL加热回流1 h，滤过，滤液上中性氧化铝柱（100~120目，5 g，内径为1.5 cm），用体积分数为40%的甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加水溶解后经水饱和正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液；用水萃取2次，每次20 mL，弃去水液。蒸干正丁醇萃取液，残渣加甲醇0.5 mL溶解，作为供试品溶液。另取黄芪对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的黄芪甲苷对照品溶液。按照处方工艺制备缺黄芪的阴性样品，取阴性样品3 g，按照供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

按照《中国药典》（2020年版）四部通则0502薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各5~10 μL，对照药材溶液和对照品溶液各3~5 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（13∶6∶2）为展开剂，展开，晾干，喷体积分数为10%硫酸乙醇溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。

结果显示，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。3批样品鉴别结果表明，该方法的重复性好、专属性强。见图2。

2.2.3 栀子的TLC鉴别

取本品内容物3 g，加体积分数为75%的乙醇20 mL加热回流30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL溶解后，依次用石油醚（60~90 ℃）萃取2次，每次10 mL，弃去石油醚液；用水饱和正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇萃取液。蒸干正丁醇萃取液，残渣加无水乙醇1 mL溶解，作为供试品溶液。另取栀子对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。再取栀子苷对照品，加乙醇制成每1 mL含4 mg栀子苷的对照品溶液。按照金荞麦扶正胶囊工艺制法，制备缺栀子的阴性样品，取阴性样品3 g，按照供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

按照《中国药典》（2020年版）四部通则0502薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各5~10 μL，对照药材溶液、对照品溶液各3~5 μL，点于同一羧甲基纤维素钠黏合的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水（5∶5∶0.5∶1）为展开剂，展开、晾干，喷体积分数为10%的硫酸乙醇，105 ℃加热至斑点显色清晰。

结果显示，供试品色谱中，在与对照药材、对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。3批样品鉴别结果表明，该方法的重复性好、专属性强。见图3。

2.2.4 地骨皮的薄层色谱鉴别

取本品内容物3 g，加水30 mL超声20 min，加入0.75 moL·L^-1盐酸20 mL振摇30 min，上清液上钠型强酸性阳离子柱（001×7），水洗至无色，再用无水乙醇-氨水（8∶2）150 mL洗脱，收集洗脱液蒸干，残渣加无水乙醇5 mL溶解，作为供试品溶液。另取地骨皮对照药材2 g，加水100 mL煎煮1 h，滤过，滤液浓缩至30 mL放冷，同法制成对照药材溶液。按照处方工艺制备缺地骨皮阴性样品，取阴性样品3 g，按照供试品溶液制备方法制得阴性样品溶液。

按照《中国药典》（2020年版）四部通则0502薄层色谱法实验，吸取供试品溶液、对照药材溶液、阴性样品溶液各5 μL，点于同一羧甲基纤维素钠黏合的硅胶G薄层板上，以丙酮-无水乙醇-盐酸（10∶6∶1）为展开剂，展开、晾干，喷体积分数为1%的三氯化铁乙醇-稀碘化铋钾（1∶10）试液，冷风吹至斑点显色清晰。

结果显示，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的斑点，阴性样品无干扰。3批样品鉴别结果表明，该方法的重复性好、专属性强。见图4。

2.3 水分检查

按照《中国药典》（2020年版）四部通则0832第二法测定。取本品2~5 g，平铺于干燥至恒质量的扁形称量瓶中，厚度≤5 mm，精密称定，105 ℃干燥5 h，置于干燥器中冷却30 min后称定质量；再干燥1 h，冷却、称定质量，至连续两次称定质量的差异≤5 mg。根据减失的质量，计算供试品中水分含量。结果表明，3批样品的水分含量分别为5.07%、5.04%、5.08%，均低于《中国药典》（2020年版）规定的8.0%限度，符合要求。

2.4 崩解时限

按照《中国药典》（2020年版）四部通则0921胶囊剂崩解时限检查法测定。3批样品的崩解时限分别为13、13、14 min，均≤30 min，符合《中国药典》（2020年版）规定。

2.5 栀子苷含量的测定

2.5.1 色谱条件

采用intersil-C₁₈色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以乙腈-水（10∶90）为流动相；流速为1 mL·min ^-1；检测波长为283 nm；进样量为10 μL；柱温为25 ℃。

2.5.2 对照品储备液的制备

精密称取栀子苷对照品（批号110749-201617，质量分数为98.1%）10.2 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成400 μg·mL^-1对照品储备液，备用。

2.5.3 供试品溶液的制备

取本品10粒内容物，混匀，精密称取约0.1 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%的甲醇20 mL，称定质量，超声处理（100 W，45 kHz）30 min，放冷至室温，用体积分数为50%的甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.5.4 阴性样品溶液的制备

按照处方比例取处方中除栀子外其余药材，按照本品胶囊制法制备缺栀子的阴性样品，取0.1 g阴性样品，按照2.5.3项下供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。

2.5.5 专属性实验

分别吸取对照品溶液、供试品溶液、缺栀子的阴性样品溶液各10 μL，按照2.5.1项下色谱条件进样测定。结果显示，栀子苷的出峰时间为21.805 min，供试品和对照品中栀子苷保留时间一致，且峰形对称、基线分离；缺栀子阴性样品溶液在对应位置无色谱峰干扰，表明方法的专属性良好。见图5。

2.5.6 线性关系考察

精密吸取栀子苷对照品储备液0.25、0.50、1.00、2.00、4.00、8.00 mL，分别置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成质量浓度分别为10.0、20.0、40.0、80.0、160.0、320.0 μg·mL^-1的系列对照品溶液。分别精密吸取上述栀子苷对照品溶液，按照2.5.1项下色谱条件进样10 μL，测定峰面积。以栀子苷的质量浓度（μg·mL^-1）为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），绘制标准曲线，得回归方程为y＝10 450x+5 574.2，相关系数r＝0.999 8，表明栀子苷在10.0~320.0 μg·mL^-1范围内线性关系良好。

2.5.7 精密度实验

精密吸取栀子苷对照品溶液（40 μg·mL^-1）和供试品溶液（批号170601）各10 μL，连续进样6次，测定峰面积值。对照品峰面积相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）为0.70%，供试品峰面积RSD为1.42%，均<2%，表明仪器的精密度良好。

2.5.8 重复性实验

精密称取样品（批号170601）0.1 g，共6份，按照2.5.3项下方法制备供试品溶液，按照2.5.1项下色谱条件进样测定栀子苷含量。结果显示，含量平均值为2.88 mg·粒^-1，RSD为0.80%（<2%），表明方法的重复性良好。

2.5.9 稳定性实验

精密称取样品（批号170601）0.1 g，按照2.5.3项下方法制备供试品溶液，按照2.5.1项下色谱条件，分别于0、2、4、6、8、10 h进样测定峰面积。结果显示，栀子苷峰面积的RSD为0.58%（<2%），表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.5.10 加样回收实验

精密称取已知含量的样品（批号170601）0.05 g，共6份，按照2.5.3项下方法制备供试品溶液，分别加入栀子苷对照品储备液1.2 mL，按照2.5.1项下色谱条件测定含量，计算回收率。结果显示，平均加样回收率为99.3%，RSD为0.57%，表明该方法的准确性良好。见表6。

2.5.11 样品测定与含量限度的制订

取3批样品，按照2.5.3项下方法制备供试品溶液，按照2.5.1项下色谱条件进样测定栀子苷含量。结果显示，3批次样品栀子苷含量为2.68~2.82 mg·粒^-1，平均值为2.73 mg·粒^-1。结合药材原料差异与工艺波动，制订含量限度为“本品每粒含栀子以栀子苷（C₁₇H₂₄O₁₀）计，不得少于1.2 mg”。见表7。

3 讨论

3.1 指标性成分的选择

中药复方成分复杂多样，指标性成分的筛选需遵循君臣佐使配伍原则。本处方中金荞麦为君药，具有清热解毒、排脓祛瘀的功效。黄芪为臣药，具有益气补中的功效，用于治疗气虚乏力。栀子为佐药，可泻火除烦、清热利湿、凉血解毒，用于辅助君药治疗火毒疮疡。地骨皮为使药，具有凉血除蒸、清肺降火的功效，用于辅助君药治疗阴虚潮热、肺热咳嗽。

参照《中国药典》（2020年版），君药金荞麦的质量评价指标为表儿茶素，但TLC和HPLC预实验结果显示，缺金荞麦阴性样品在表儿茶素对应检测位置存在干扰峰，专属性不足，故无法将其作为本制剂的指标性成分。臣药黄芪的质控指标为黄芪甲苷，但在色谱条件优化过程中发现，制剂样品在黄芪甲苷对应保留时间无特征峰，推测其原因可能为黄芪甲苷相对分子质量较大、水溶性差，水提工艺难以实现高效提取；同时黄芪甲苷的前处理操作繁琐且易造成成分损失；此外，黄芪甲苷含量受药材产地、生长年限、药用部位等因素影响显著^［9］，批间稳定性难以把控，因此，黄芪甲苷不适宜作为金荞麦扶正胶囊的指标性成分。

佐药栀子含有萜类、有机酸酯、黄酮等成分，其中环烯醚萜类成分栀子苷为其核心活性物质，且被《中国药典》（2020年版）列为栀子药材和饮片质量控制的指标性成分^［10］。本研究经色谱条件优化发现，制剂样品中栀子苷特征峰保留时间与对照品一致，峰形对称且分离度良好，缺栀子阴性样品无干扰，满足指标性成分的筛选要求，故最终选择栀子苷作为金荞麦扶正胶囊的质量控制指标性成分。

3.2 TLC定性鉴别

目前尚无金荞麦扶正胶囊的法定薄层色谱鉴别标准。本研究结合处方药材特性，参照《中国药典》（2020年版）方法并借鉴相关文献报道，分别建立了金荞麦、黄芪、栀子、地骨皮的TLC鉴别方法。

金荞麦的主要活性成分为黄酮类、三萜类、甾体类、有机酸类等化学成分，其中黄酮类成分是其药效物质基础^［11］，本研究采用聚酰胺柱色谱法对供试品进行纯化^［12］，可有效富集黄酮类成分，排除其他杂质干扰；黄芪的核心活性成分为多糖类、皂苷类^［13］，《中国药典》（2020年版）以黄芪甲苷为黄芪质量控制的指标，故采用中性氧化铝柱层析纯化，以去除制剂中糖类等水溶性杂质，提升鉴别专属性；地骨皮主要含有生物碱类、苯丙素类、蒽醌类、有机酸等成分，其中生物碱是其主要活性成分^［14］，通过钠型强酸性阳离子交换柱纯化，可实现生物碱类成分的富集与分离。

此外，系统性考察结果显示，在不同温度（10、27、40 ℃）、不同相对湿度（30%、50%、80%）条件下，均不影响其斑点的重复性。

3.3 含量测定方法的考察

针对金荞麦扶正胶囊的含量测定，本研究选择以栀子苷含量为核心评价指标，通过优化样品的提取方式、提取溶剂和提取时间确定含量测定的最佳提取方法。

3.3.1 提取方法的考察

采用超声、回流和索式提取3种提取方式进行考察，结果显示，索式提取含量为2.79 mg·粒^-1；超声提取与回流提取含量均为2.91 mg·粒^-1，因超声提取更简便、快捷，故采用超声提取法。

3.3.2 提取溶剂的考察

采用甲醇、50%甲醇、乙醇作为提取溶剂进行考察，结果显示，甲醇、50%甲醇、乙醇提取时含量分别为2.90、2.95、2.75 mg·粒^-1，以50%甲醇作为提取溶剂时的含量最高，故采用50%甲醇作为提取溶剂。

3.3.3 提取时间的考察

采用超声提取15、30、45 min进行考察，结果显示，超声提取15、30、45 min所得含量分别为2.77、2.91、2.85 mg·粒^-1，其中超声30 min所得含量最高，故将超声提取时间定为30 min。

4 结论

本研究以栀子苷含量为核心评价指标，通过正交实验优化金荞麦扶正胶囊的提取工艺，确定最佳工艺参数为：药材不浸泡，加10倍量水煎煮3次，每次2 h，提取液浓缩至稠膏相对密度为1.15~1.20（60 ℃）。同时建立了制剂的质量控制方法：采用TLC对处方中金荞麦、黄芪、栀子和地骨皮4种药材进行定性鉴别，特征斑点清晰、专属性强、阴性样品无干扰；采用HPLC测定栀子苷含量，该成分在10.0~320.0 μg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 8），加样回收率分别为98.5%~100.0%（RSD=0.57%），精密度、稳定性、重复性的RSD均<2%，并制订含量限度为每粒含栀子以栀子苷（C₁₇H₂₄O₁₀）计不得少于1.2 mg。

综上所述，本研究优化的提取工艺稳定可行，建立的质量标准方法专属性强、重复性好，可用于金荞麦扶正胶囊的生产工艺控制与成品质量评价，为该制剂的临床应用提供可靠的技术支撑。

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基金资助

广西医疗卫生适宜技术开发与推广应用项目(S2017091)

南宁市科技局重点研发计划项目(20193116)