渗透压溶胀法在红细胞提取血红蛋白工艺中的优化

摘要

目的 采用渗透压溶胀法提取红细胞中血红蛋白(hemoglobin, Hb),预期目标为血红蛋白溶出率≥80%和细胞膜完整率≥70%。方法 以人脐带血红细胞为原料，磷酸盐缓冲液为红细胞的溶胀液。选择磷酸盐缓冲液渗透压摩尔浓度、低渗磷酸盐缓冲液pH值、低渗磷酸盐缓冲液与洗涤红细胞体积比进行三因素三水平正交试验(n=3),确定较佳匹配条件。分别采用较佳匹配条件和原工艺条件制备红细胞溶胀液样品(n=6),检查血红蛋白溶出率、细胞膜完整率。扩大对比实验中，分别采用较佳匹配条件和原工艺条件制备红细胞溶胀液样品(n=6),并经超滤膜过滤，考查过滤时间、血红蛋白收率。结果 正交试验得出制备红细胞溶胀液较佳匹配条件：渗透压摩尔浓度为30 mOsmol/Kg、pH为7.8、磷酸盐缓冲液与红细胞体积比为6∶1。本条件下红细胞溶胀液样品与原工艺样品比较：血红蛋白溶出率为(82.4±1.8)%vs(78.6±3.0)%(P<0.05),细胞膜完整率为(65.8±4.0)%vs(28.7±2.3)%(P<0.05)。扩大对比实验中，较佳匹配条件与原工艺条件比较：过滤时间(327±9)s vs(434±13)s(P<0.05),血红蛋白收率为(72.3±1.2)%vs(66.0±1.4)%(P<0.05)。结论 通过正交试验优选出的血红蛋白提取工艺与原制备工艺相比，在保证了血红蛋白溶出率略高的情况下，大大降低了细胞膜的破碎率，减少了细胞膜基质进入目标溶液中，为后续细胞膜分离及进一步纯化降低了制备难度。

关键词

人脐带血红细胞 / 磷酸盐缓冲液 / 正交试验 / 血红蛋白类氧载体