不同激活条件下PRR源性外泌体特征及其对HMEC-1和BJ增殖能力差异的比较研究

摘要

目的 比较不同激活条件下富血小板血浆源性外泌体（platelet-rich plasma derived exosomes, PRP-Exos）的特征及其人微血管内皮细胞（HMEC-1）和人皮肤成纤维细胞（BJ）增殖能力的差异。方法 招募10名健康志愿者，采集EDTA-K₂抗凝静脉血10 mL,应用二次离心法制备提取PRP-Exos。通过透射电镜（TEM）、纳米颗粒追踪分析（NTA）和免疫印迹法（WB）检测技术，比较PRP-Exos的形态特征、粒径分布和浓度及表面标志蛋白的表达；通过体外细胞培养，比较不同激活剂组PRP-Exos对人微血管内皮细胞（HMCE-1）和人皮肤成纤维细胞（BJ）形态变化和增殖能力的差异。结果 1)TEM观察显示：不同激活剂组PRP-Exos形态不同。2)NTA分析显示：与生理盐水组粒径（109.60±2.71）nm相比，凝血酶组粒径（104.93±1.55）nm和混合剂组粒径（103.83±1.58）nm相对较小，葡萄糖酸钙组粒径（113.57±4.70）nm较大且粒径分布尺寸较宽，不同组间比较差异有统计学意义（F=7.019,P<0.05）;凝血酶和葡萄糖酸钙混合剂组获得的外泌体浓度最高[（4.87±0.63）×10⁶ particles/mL,P<0.001],凝血酶组[（2.75±0.13）×10⁶ particles/mL,P<0.01]和葡萄糖酸钙组[（3.82±0.06）×10⁶ particles/mL,P<0.001]与生理盐水组相比均获得更高浓度的外泌体；葡萄糖酸钙组略高于凝血酶组，两组之间比较存在明显差异性（P<0.05）。3)WB分析显示：PRP-Exos表面表达CD41、CD81及TSG101,其中CD41、TSG101在凝血酶和葡萄糖酸钙混合剂组中的蛋白信号强度最强（P<0.001）。4)体外细胞培养结果显示：凝血酶和葡萄糖酸钙混合剂组PRP-Exos可显著促HMEC-1和BJ的增殖（P<0.05）。结论 凝血酶和葡萄糖酸钙混合剂组PRP可获得最高浓度的外泌体；在体外培养条件下，凝血酶和葡萄糖酸钙混合剂组PRP-Exos可显著促进HMEC-1和BJ的增殖。

关键词

PRP / 外泌体 / 凝血酶 / 葡萄糖酸钙 / 人微血管内皮细胞 / 人皮肤成纤维细胞 / 细胞增殖