无创胎儿游离DNA RHE血型基因型诊断技术的准确性和可行性研究

摘要

目的 探讨利用孕妇外周血中胎儿游离DNA(Cell-Free Fetal DNA,cff-DNA)进行无创产前诊断胎儿RHE血型基因型的准确性和可行性。方法 选择2023年11月—2024年8月在本院建档的单胎且RhE血型为Rhee的纯合子孕妇134例，应用游离DNA提取试剂盒提取孕妇外周血中游离DNA,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)方法检测游离DNA的RHE血型基因型。当标本RT-qPCR扩增信号阴性时，对其进行甲基化RASSF1A基因扩增，扩增结果阳性作为成功提取到胎儿游离DNA的标志。血清学微柱凝胶法检测新生儿外周血的RhE血型表现型作为结果验证。结果 134例孕妇外周血标本中胎儿游离DNA检测的RHE血型基因型与新生儿外周血RhE血型表现型结果一致的有133例，其中RHee基因型90例，RHE基因型43例，诊断符合率为99.3%,灵敏度为97.7%,特异度为100%,约登指数为0.977,ROC曲线下面积0.995,Kappa值0.983,阳性预测值100%,阴性预测值98.9%。1例标本检测失败，经过甲基化RASSFIA基因扩增，验证其失败原因为该例标本未提取到胎儿游离DNA。妊娠早期、中期、晚期诊断符合率分别为93.8%(15/16)、100%(51/51)、100%(67/67),经Fisher精确概率法计算，P>0.05,说明3组妊娠周期间的诊断符合率差异无统计学意义，该方法在不同妊娠时期检测的符合率没有差异。结论 利用孕妇外周血中胎儿游离DNA检测胎儿RHE血型基因型，是1种准确率高，可行性强的无创产前诊断方法，有助于临床诊断抗-E引起的胎儿新生儿溶血病。

关键词

无创产前诊断 / 胎儿RhE血型 / 胎儿游离DNA / 胎儿新生儿溶血病 / 实时荧光定量PCR