从滤白残留物中回收单个核细胞的稳定性研究

摘要

目的 选出一种反冲“滤白后的白细胞滤器”后可获取更多外周血单个核细胞(PBMC)的溶液，兼顾反冲所得滤白残留物活率、长期放置稳定性以及无菌保障，为临床转化提供可行方案。方法 分别采用包装方式为袋装的可无菌接管的生理盐水、溶媒、Hanks溶液对随机分组的滤器进行反冲，比较反冲所得滤白残留物的有核细胞数量回收率、活率；选用确定的反冲溶液增加研究样本，比较静置1 h和48 h后滤白残留物与从中回收所得PBMC的活率及数量；将滤白残留物中获取的PBMC细胞于液氮中冻存1个月，比较冻存前后PBMC细胞的活率、扩增能力等指标。结果 溶媒组反冲获得的有核细胞数回收率最高且更稳定，对400 mL全血过滤后滤器中白细胞的回收率可达(21.3±1.6)%,其余两组回收率为(19.2±6.3)%与(11.2±5.0)%,各组活率>90%;溶媒反冲所得滤白残留物静置48 h后有核细胞活率与静置1 h组无生物学上差异[(93.3±2.3)%vs(95.7±1.8)%]。静置48 h与1 h滤白残留物分离所得PBMCs细胞回收率无统计学差异[(48.2%±9.5%)vs(40.41%±8.35%),P>0.05],数量为(17.7±2.6)×10～7个细胞；静置48 h滤白残留物分离所得PBMCs冻存1个月后复苏培养10 d,活率可恢复至(91.2±3.2)%,扩增倍数可达到(61.9±15.9)倍。结论 袋装溶媒作为1种反冲溶液，可与“滤白后的白细胞滤器”通过接管连接后获取无菌有保障的滤白残留物，该滤白残留物在2℃～8℃环境中放置48h,对PBMCs活率和回收率无明显影响，在液氮中储存1个月不影响复苏后的PBMCs细胞的存活率和扩增，可满足血站的现行规范，同时规避细胞通用型企业对原材料传染病窗口期的顾虑，为临床应用转化提供新的可行性方案。

关键词

白细胞滤器 / 反冲溶液 / 滤白残留物 / 外周血单个核细胞