人ITGB3基因c.598G/A突变体外表达分析及其与新生儿同种免疫性血小板减少症发生的关系探讨

摘要

目的 通过ITGB3基因c.598G>A突变体外表达，探讨其是否参与了胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症（fetal and neonatal alloimmune thrombocytopenia, FNAIT）的发生。方法 运用商品化酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）、固相凝集法、流式细胞术以及金标准单克隆抗体特异性捕获血小板抗原技术（monoclonal antibody-specific immobilization of platelet antigens, MAIPA）检测患儿及其母亲血清中存在的血小板抗体。采用HPA-SSP法获得患儿及其父母的常见血小板抗原（human platelet antigens, HPAs）基因型。通过ITGB3和ITGA2B基因外显子测序分析是否存在基因突变。利用已有的人血小板cDNA进行PCR扩增，获取ITGB3目的基因，并借助TA克隆技术构建野生型ITGB3真核表达载体，点突变获得598G>A突变型ITGB3真核表达载体，与ITGA2B（αⅡb）的质粒DNA共转染HEK293细胞，筛选获得稳定表达GPⅡb/Ⅲa的转染细胞。通过流式和MAIPA检测598G>A突变型转染细胞的GPⅡb/Ⅲa表达情况以及母亲血清中是否存在针对该突变的抗体。结果 患儿母亲血清中检出针对HLA-Ⅰ类和GPⅡb/Ⅲa糖蛋白的抗体，后续HLA抗体特异性检测证实存在针对HLA-B^*57∶01和A^*02∶05的抗体。ITGB3测序显示，患儿及其父亲携带c.598G>A点突变，可导致第200位谷氨酸变成赖氨酸。利用构建的c.598G>A突变转染细胞与母亲血清反应，未检出针对GPⅡb/Ⅲa糖蛋白的抗体。结论 通过ITGB3基因c.598G>A突变体外表达及检测分析，否定了该突变参与的FNAIT发生，此方法的建立有利于发现新的血小板低频抗原，为不良孕产史患者相关血小板抗原抗体的检测奠定了理论基础。

关键词

ITGB3基因 / 血小板膜蛋白GPⅢa / FNAIT / 体外表达