基于噬菌体展示技术鉴定与RhE抗原高亲和力的小分子多肽

摘要

目的 通过采用噬菌体展示技术鉴定与RhE抗原特异性结合的小分子多肽，为小分子多肽免疫预防RhE同种免疫提供理论基础。方法 人工合成具有RhE抗原特异性氨基酸的1条多肽(FLWMFWPSVNSPLLRSPIQRKNA)作为靶目标，利用噬菌体展示技术，将随机噬菌体十二肽库与人工合成的多肽进行体外筛选，通过2轮体外筛选和单克隆噬菌体ELISA鉴定后，进行扩增纯化。对阳性噬菌体克隆进行测序，推导出与RhE抗原特异结合的外源性多肽氨基酸序列，通过抗体抑制实验鉴定与RhE抗原特异性结合的靶向多肽。结果 利用噬菌体随机12肽库对靶多肽进行2轮淘选结果显示，与靶多肽特异性结合的噬菌体明显富集。从富集的噬菌体中随机挑取96个噬菌体克隆进行ELISA检测，结果显示23个与靶多肽有较好亲和力的阳性克隆，再次经过ELISA验证，其中13个噬菌体克隆的检测结果与初次鉴定结果一致，提示这些克隆与靶蛋白具有较好的亲和力。将上述13个噬菌体克隆扩增，提取单链DNA测序分析，翻译获得5条氨基酸序列：THDRNNTPVWRF,TPYETIFDPRTS,TFWQMSADTQAL,AASSTLSIYPPR和SHDTRSPFTWGR。与抗-E抗体的竞争性抑制实验结果显示5个噬菌体展示肽与抗-E均具有竞争性抑制作用。结论 基于噬菌体展示技术成功地鉴定出与RhE抗原特异性结合的5个小分子多肽，可能为将来小分子多肽预防HDFN提供研究基础，也为预防RhE抗原同种免疫提供新思路。

关键词

噬菌体展示技术 / RhE抗原 / 红细胞同种免疫 / 小分子多肽 / 胎儿/新生儿溶血病