人源单克隆抗-P免疫球蛋白基因可变区序列分析

摘要

目的 阐明1株红细胞血型特异性单克隆抗体重链和轻链互补决定区的结构、基因重排方式以及体细胞高频突变特点。方法 以自行研发的分泌人源IgMκ轻链单克隆抗-P抗体杂交瘤细胞株为研究对象，提取新鲜培养细胞总RNA，通过随机引物逆转录成cDNA第1链，特异性引物扩增重链和轻链基因可变区片段，并进行DNA测序获得编码抗-P抗体的免疫球蛋白重链和轻链可变区核苷酸序列，使用Ig-BLAST工具与NCBI数据库在线比对。结果 明确了1株人源单克隆抗-P免疫球蛋白重链和轻链可变区互补决定区（CDR）、框架区（FR）结构及V（D） J重排方式，揭示了免疫球蛋白重链基因使用的VH、VD、VJ和轻链基因使用的VL和VJ胚系等位基因片段。该株人源单克隆抗-P重链基因重排方式为:IGHV6-1^*01—IGHD5-18^*02—IGHJ4^*02;轻链基因重排方式为:IGκV1-12^*01—IGκJ3^*01。重链可变区在胚系基因IGHV6-1^*01的基础上发生9个碱基突变，轻链可变区在胚系基因IGκV1-12^*01的基础上发生5个碱基突变。结论 本株针对红细胞高频P抗原的单克隆抗体细胞株CDR结构的阐明，为构建重组抗体表达质粒，定向改造抗体类型奠定了基础。

关键词

人单克隆抗-P抗体 / 互补决定区 / 胚系基因 / 基因重排