基因重组IgG1 κ抗-P质粒构建及其在HEK293T细胞的表达

摘要

目的 在人源杂交瘤细胞株的工作基础上,构建IgG1 κ轻链基因重组质粒并在真核细胞中表达。方法 以编码单克隆IgMκ轻链抗-P抗体的IgH和IgL可变区RT-PCR产物为起点,通过巢式PCR引入限制性内切酶的酶切位点,载有抗体恒定区的质粒分别与VH和VL外源DNA片段重组,连接产物转入感受态大肠杆菌E. coli DH5ɑ,在抗性培养基中筛选阳性克隆,重组质粒DNA经测序验证后转染HEK293T细胞,在培养上清中收获重组抗体。鉴定重组表达抗体类型,血清学凝集试验和流式细胞术检测重组抗体特异性。结果 成功构建了pFUSEssCHIg-hG1+VH和p FUSE2ss-CLIg-hκ+VL重组质粒。在重组质粒转染的HEK293T细胞培养上清中检测到人IgG1,kappa轻链抗体,培养上清经超滤浓缩后与抗原阳性红细胞可发生凝集反应,流式细胞实验中重组抗体与抗原阳性红细胞反应的平均荧光强度高于抗原阴性红细胞。结论 通过基因重组技术进行红细胞血型抗体类型转换的实验研究,为建立基因重组改型抗体试剂的研发进行了有益的尝试。

关键词

人单克隆抗-P抗体 / 基因重组质粒 / 人胚肾细胞