无创胎儿M血型抗原实时荧光定量PCR基因分型方法的建立及初步评价

摘要

目的 从母体血浆中提取胎儿游离DNA(Cell-free fetal DNA,cff-DNA),建立胎儿M血型抗原基因分型的检测方法,从而指导检出IgG抗-M抗体的M抗原阴性孕妇的孕期管理。方法 建立实时荧光定量PCR(Real-time PCR)方法,通过基因组DNA配比稀释,确证方法的特异性和灵敏度。随后,纳入12例M抗原阴性孕妇,提取孕妇外周血血浆中的胎儿游离DNA(cff-DNA),对胎儿进行M抗原基因分型,根据有/无扩增曲线判断胎儿M抗原为M阳性/M阴性。通过比对胎儿M抗原基因分型结果和新生儿出生后脐血或外周血M抗原血清学检测结果,初步验证该方法的准确性。结果 在纳入的12例M抗原阴性孕妇中,5例检出抗-M,其中4例存在IgG抗-M,且1例发生了胎儿期贫血。胎儿M抗原基因分型结果为M阳性的9例(9/12,75%),M阴性的3例(3/12,25%)。有4例基因分型结果为M阳性的胎儿和1例基因分型结果为M阴性的胎儿,在出生后收集到了血液标本,这5例标本血清学检测结果与基因分型检测结果一致。结论 我们首次建立了无创产前胎儿M血型抗原基因检测方法,初步证明了利用母体血浆cff-DNA通过实时荧光定量PCR方法预测胎儿M抗原基因型的可行性。

关键词

抗-M胎儿新生儿溶血病 / 胎儿游离DNA / 无创胎儿M抗原基因检测 / 实时荧光定量PCR方法