ABO^* B.01-O.01.02基因重组导致Ael血型的分子机制研究

摘要

目的 分析1例Ael亚型的血清学与分子生物学特征。方法 采用试管法进行ABO血清学定型。采用序列特异性引物聚合酶链反应（PCR-SSP）进行ABO基因分型,利用Oxford Nanopore三代测序（TGS）方法鉴定其基因型,并应用Pymol、Polyphen2、PROVEAN、DUET等生物信息学软件预测突变对蛋白质结构和功能的影响。结果 血清学鉴定为Ael亚型。PCR-SSP基因分型结果为A/O2;TGS测序获得了2个ABO全长单倍型序列,分析确认第1个单倍型为ABO^*O. 01.02;第2个单倍型为ABO^*B. 01-O. 01.02的重组单倍体,其重组断点位于c. 357-39和c.526G>C之间。该重组等位基因突变位点包括c. 297A>G、c. 646T>A、c. 681G>A、c. 771C>T、c. 829G>A,其中c. 646T>A（p. Phe216Ile）和c. 829G>A（p. Val277Met）为2个功能性氨基酸替换位点。蛋白质结构建模显示,蛋白质局部结构及氢键网络改变;功能预测表明蛋白质稳定性降低。结论 本研究在ABO等位基因B. 01与O. 01.02之间发现一处位于内含子6至外显子7区域的重组,形成B. 01-O. 01.02重组基因。该重组基因导致B糖基转移酶关键氨基酸发生替换,引起酶蛋白局部结构改变与稳定性下降,最终表现为Ael血型抗原表型。

关键词

ABO血型系统 / 基因重组 / Ael表型 / 三代测序 / 生物信息学分析