笃斯越桔酵母双杂文库的构建及Vu MYB1互作蛋白的筛选

张东, 陈佳禚, 刘佳茹, 魏一, 王微, 宗成文

doi:10.13478/j.cnki.jasyu.2025.01.005

延边大学农学学报 ›› 2025, Vol. 47 ›› Issue (01) : 32 -39. DOI: 10.13478/j.cnki.jasyu.2025.01.005

笃斯越桔酵母双杂文库的构建及Vu MYB1互作蛋白的筛选

张东, 陈佳禚, 刘佳茹, 魏一, 王微, 宗成文

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摘要

MYB转录因子在植物中广泛参与次生代谢产物的调控、细胞形态的建成、逆境响应及生长发育等多个方面,同时也是植物花青素生物合成的重要调控因子。该课题组前期筛选到一个可以正向调控花青苷合成的基因Vu MYB1。为了深入探究该基因的作用机制,该研究以笃斯越桔蓝果果皮为材料,构建了酵母双杂交c DNA文库,以Vu MYB1为诱饵蛋白构建诱饵载体,通过酵母双杂交系统来筛选酵母双杂交文库,确定与Vu MYB1互作的蛋白。结果表明:c DNA文库库容为1.25×10～7CFU,文库插入片段平均大小约为1.2Kbp,阳性率为100%。通过酵母双杂交筛库及回转验证获得了6种与Vu MYB1互作的蛋白。该研究有助于进一步解析Vu MYB1调控花青苷生物合成的分子机理。