基于猪附红细胞体膜蛋白的间接ELISA检测方法的建立及初步应用

摘要

为建立有效的猪附红细胞体病间接酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测方法,该试验利用猪附红细胞体水溶性膜蛋白为包被抗原,优化反应条件,建立了猪附红细胞体病间接ELISA检测方法。结果表明:提取的猪附红细胞体脂溶性膜蛋白的分子量主要集中在25～35Ku;猪附红细胞体水溶性膜蛋白的分子量主要集中在45～180Ku。建立的间接ELISA检测方法最佳反应条件:膜蛋白最佳包被浓度为0.15μg/μL;最佳封闭条件为5%脱脂乳37℃封闭2h;血清最佳稀释倍数为1∶320;酶标二抗最佳稀释倍数为1∶2000;TMB显色时间为37℃5min。特异性试验中,包被抗原与弓形虫、猪肺炎支原体,以及猪大肠杆菌阳性血清无交叉反应。重复性试验结果显示,批内变异系数为2.62%～8.89%,批间变异系数为5.49%～9.65%。对40份猪血清进行检测,建立的间接ELISA方法检出阳性样品19份,阳性率为47.5%。这说明建立的间接ELISA检测方法特异性强、敏感性高,将为猪附红细胞体病的临床诊断提供准确便捷的血清学检测手段。

关键词

猪附红细胞体 / 膜蛋白 / 临床检测 / 间接ELISA检测方法 / 抗体检测