桑泛素基因的克隆和表达

高维锡; 庄艳; 常润磊; 邹宁

doi:10.13951/j.cnki.37-1213/n.2009.04.005

烟台大学学报（自然科学与工程版） ›› 2009, Vol. 22 ›› Issue (4) : 264 -267. DOI: 10.13951/j.cnki.37-1213/n.2009.04.005

桑泛素基因的克隆和表达

高维锡, 庄艳, 常润磊, 邹宁

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摘要

根据桑(Morus bombycis)泛素基因编码区的序列(DQ839402.)设计特异引物,用RT-PCR方法克隆桑泛素基因的编码区.序列分析表明,该编码区长240 bp,编码79个氨基酸,软件分析推测编码蛋白的相对分子量和等电点分别为8.74 kD和7.16.通过同源建模获得了桑泛素基因编码蛋白的理论三维结构.将桑泛素基因与pET-32a(+)连接,构建原核表达载体pET-32a-ub,经IPTG诱导,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得高效表达,并经western bolt印迹证明实现了原核表达,为进一步研究其作用机理奠定基础.