IL18-IL2融合基因的克隆及其在大肠埃氏菌(E.coli)中的表达

杜广营; 张国营; 刘昆; 栾金灵; 段慧英

doi:10.13951/j.cnki.37-1213/n.2011.02.004

烟台大学学报（自然科学与工程版） ›› 2011, Vol. 24 ›› Issue (2) : 116 -120. DOI: 10.13951/j.cnki.37-1213/n.2011.02.004

IL18-IL2融合基因的克隆及其在大肠埃氏菌(E.coli)中的表达

杜广营, 张国营, 刘昆, 栾金灵, 段慧英

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摘要

构建IL-18和IL-2成熟区的融合基因IL18-IL2,并实现其在大肠埃氏菌中的大量表达.抽提经PHA刺激增殖的人淋巴细胞总RNA,RT-PCR法获得IL-18和IL-2基因的成熟区序列,并通过一段Linker相连得到融合基因IL18-IL2;将IL18-IL2克隆至原核表达载体pBV220,并转化至大肠埃氏菌BL21(DE3);阳性克隆经42℃温度诱导表达后用SDS-PAGE和Western blot分析重组蛋白的表达情况及正确性.经SDS-PAGE分析,融合基因IL18-IL2在宿主菌中能够表达,其相对表观分子质量约为34.5 kD;Western blot进一步证明重组蛋白正确.实验结果表明,已成功构建了表达人IL18-IL2的菌株,为进一步研究融合蛋白IL18-IL2体内外抗肿瘤活性提供了基础.