13C6-酪氨酸标记的蛋清溶菌酶的表达及NMR测定

王瑞英; 余飞; 刘万卉

doi:10.13951/j.cnki.37-1213/n.2019.03.006

烟台大学学报（自然科学与工程版） ›› 2019, Vol. 32 ›› Issue (3) : 233 -237. DOI: 10.13951/j.cnki.37-1213/n.2019.03.006

¹³C₆-酪氨酸标记的蛋清溶菌酶的表达及NMR测定

王瑞英, 余飞, 刘万卉

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摘要

针对蛋白质核磁共振(NMR)信号复杂难以解析的问题,选用选择性标记方法可简化蛋白质NMR谱图.本实验以蛋清溶菌酶(HEL)为目标蛋白,构建了p ET-HEL蛋白表达载体,转入到大肠杆菌Ε. coli BL21(DE3)中,得到重组菌株.然后通过改变诱导温度、诱导浓度以及诱导时间等条件来优化HEL在大肠杆菌Ε. coli BL21(DE3)中的表达条件,通过SDS-PAGE电泳分析,确定了最佳表达条件:37℃、0. 4 mmol/L IPTG诱导8 h.按最佳条件于诱导前加入13C6-酪氨酸进行选择性标记,扩大表达,经过变复性处理与Ni柱纯化后,获得选择性标记的HEL.进一步制备标记蛋白核磁样品进行测定,得到简化的NMR谱.本研究为采用NMR简化分析蛋白质的结构奠定了基础.