荷叶碱逆转油酸诱导的血管内皮细胞衰老

摘要

旨在探究油酸诱导脂毒性介导血管内皮细胞衰老机制及荷叶碱对其干预作用。以体外培养人血管内皮细胞系作为研究对象，通过油酸暴露诱导血管内皮细胞衰老，RNA干扰(siRNA)构建Sirt6基因沉默细胞，采用SRB法测定细胞活力，Western blot检测β-半乳糖苷酶(β-Gal)蛋白表达及显色底物染色检测细胞衰老，PI单染后流式细胞术检测细胞周期分布，Western blot和荧光定量PCR方法检测p16、p21和p53蛋白和mRNA表达水平。结果表明，高浓度油酸(900μmol/L)孵育72 h显著抑制细胞增殖，上调β-Gal蛋白表达水平和阳性着色细胞比例，并阻滞细胞周期于G0/G1期，且浓度依赖性诱导p21、p16和p53的蛋白和mRNA表达升高。荷叶碱对细胞增殖无明显影响，但显著拮抗油酸诱导的β-Gal表达上调和细胞阳性着色，下调油酸诱导的p21、p16和p53的蛋白和mRNA表达上调。分子对接分析表明，荷叶碱与Sirtuins家族中Sirt6的结合能力最强。荷叶碱明显逆转油酸诱导的Sirt6蛋白和mRNA表达下调。Sirt6基因沉默致荷叶碱对油酸诱导衰老相关因子表达上调的拮抗作用消失。提示Sirt6介导了荷叶碱逆转油酸诱导的血管内皮细胞衰老。

关键词

血管内皮细胞衰老 / 脂毒性 / 荷叶碱 / Sirt6

基金资助

山东省自然科学基金资助项目(ZR2019MH094)