大豆酵母双杂交混合文库构建及GmCTP互作蛋白筛选

单童; 陈磊; 徐文静; 林越; 朱雁; 赵婧

doi:10.13951/j.cnki.37-1213/n.240316

烟台大学学报（自然科学与工程版） ›› 2025, Vol. 38 ›› Issue (3) : 325 -330. DOI: 10.13951/j.cnki.37-1213/n.240316

大豆酵母双杂交混合文库构建及GmCTP互作蛋白筛选

单童, 陈磊, 徐文静, 林越, 朱雁, 赵婧

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摘要

通过Gateway技术构建优异大豆品种冀豆17根、茎、叶、花4种器官组织的酵母双杂交混合文库，筛选与大豆叶形及花发育调控新基因GmCTP编码蛋白的互作因子，为后续对GmCTP基因的调控机制分析提供重要线索。结果表明：酵母次级文库重组率为100%,库容CFU=1.44×10⁷,文库滴度为3.6×10⁷个/mL,插入片段的平均长度大于1000 bp。自激活检测显示诱饵载体pGBKT7-CTP无自激活活性。通过酵母mating方法进行文库筛选，在四缺培养基上检测到110个阳性菌落，通过四缺+X-α-Gal复选，得到45个强阳性蓝色菌落。阳性菌落PCR测序结果发现阳性菌落中的LBD家族基因的功能与GmCTP基因突变导致的表型密切相关，为后续对GmCTP基因调控叶形发育的分子机制提供了重要线索。