Hippo信号通路关键蛋白YAP调控巨噬细胞极化的分子机制研究

摘要

目的:探讨Hippo信号通路关键蛋白YAP调控巨噬细胞极化的分子机制。方法:单核细胞系THP-1细胞经佛波酯诱导成为巨噬细胞作为对照组,经脂多糖诱导为M1型巨噬细胞组,经白细胞介素-4诱导为M2型巨噬细胞组,取对数生长期的M1型巨噬细胞分别转染YAP表达质粒、对照质粒及空载体,收集各组细胞,采用流式细胞术检测M1型和M2型巨噬细胞标志物水平,酶联免疫吸附法检测M1型和M2型巨噬细胞特异性分泌因子水平,实时定量PCR检测mRNA表达水平,Western blot检测蛋白表达。结果:流式细胞术检测结果显示,与对照组细胞相比,诱导的CD86⁺（M1型巨噬细胞标志物）和CD206⁺（M2型巨噬细胞标志物）细胞比例增加（P<0.05）;酶联免疫吸附法检测结果显示,M1型巨噬细胞组培养上清液中TNF-α水平高于对照组和M2型巨噬细胞组（P<0.05）,M2型巨噬细胞组培养上清液中TGF-β水平高于对照组和M1型巨噬细胞组（P<0.05）,提示M1型和M2型巨噬细胞诱导成功。实时定量PCR检测结果显示,YAP在M1型巨噬细胞中的表达水平低于M2型巨噬细胞（P<0.05）;Western blot检测结果显示,YAP在M1型巨噬细胞中的表达水平低于M2型巨噬细胞（P<0.05）,提示YAP可能与M2型巨噬细胞的表型维持有关。实时定量PCR检测结果显示,与对照质粒组相比,YAP表达质粒组中,M1型巨噬细胞标志物IL-1βmRNA表达水平降低（P<0.05）,M2型巨噬细胞标志物CCL22 mRNA表达水平升高（P<0.05）;Western blot检测结果显示,与对照质粒组相比,YAP表达质粒组中,M1型巨噬细胞标志物IL-1β蛋白表达水平降低（P<0.05）,M2型巨噬细胞标志物CCL22蛋白表达水平升高（P<0.05）,提示YAP可能抑制M1型巨噬细胞的形成和促进M2表型形成。结论:Hippo信号通路关键蛋白YAP表达高低可调控巨噬细胞极化,YAP表达升高可抑制M1型巨噬细胞的形成和促进M2表型形成。

关键词

巨噬细胞 / 极化 / Hippo信号通路 / YAP