miR-499a-5p通过靶向TLR2抑制缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡

摘要

目的:探究miR-499a-5p与TLR2的靶向关系，及其对缺氧/复氧(A/R)诱导的心肌细胞氧化应激和凋亡的影响。方法:培养H9c2细胞并分为模型组和对照组，对照组在常氧条件下培养，模型组为缺氧/复氧模型，并进一步分为miR-NC组、miR-499a-5p组、anti-miR-NC组、anti-miR-499a-5p组、miR-499a-5p+pGL3-Basic组和miR-499a-5p+pGL3-Basic+TLR2组；流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率；qRT-PCR检测miR-499a-5p和TLR2 mRNA的表达水平；免疫印迹(Western blot)检测TLR2、B淋巴细胞瘤因子2XL(Bcl-xL)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)蛋白表达；酶联免疫吸附法(ELISA)检测活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量；双荧光素报告基因检测验证miR-499a-5p与TLR2的靶向关系。结果:与对照组相比，模型组中miR-499a-5p表达降低，TLR2表达升高(P<0.05);过表达miR-499a-5p可降低A/R模型心肌细胞凋亡和氧化应激作用，并靶向抑制TLR2;过表达TLR2逆转了miR-499a-5p对A/R模型心肌细胞抗凋亡及降低氧化应激的作用。结论:miR-499a-5p可能通过靶向抑制TLR2的激活，降低心肌细胞凋亡率及氧化应激反应，发挥保护心肌细胞的作用。

关键词

miR-499 / TLR2 / 心肌细胞 / 缺氧/复氧 / 氧化应激 / 细胞凋亡