ZDHHC20对m5C阅读器YBX1的棕榈酰化修饰通过调节mRNA m5C甲基化促进结直肠癌进展

摘要

目的:探讨棕榈酰基转移酶20(ZDHHC20)通过棕榈酰化修饰调节5-甲基胞嘧啶(m5C)阅读器Y-框结合蛋白1(YBX1)蛋白稳定性，并提高mRNA m5C修饰水平参与结直肠癌(CRC)发生发展的分子机制。方法:通过生物信息学方法分析ZDHHC20 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达及ZDHHC20表达水平与CRC患者临床病理特征的关系。通过RT-qPCR检测CRC细胞中ZDHHC20的表达水平。CCK-8检测ZDHHC20对CRC细胞增殖的影响，Transwell实验用于检测ZDHHC20对细胞侵袭的影响。通过生物信息学数据库分析ZDHHC20与YBX1的相关性及YBX1蛋白的棕榈酰化修饰位点。酰基生物素交换法(ABE)富集棕榈酰化蛋白，Western blot实验检测CRC细胞中YBX1的棕榈酰化修饰。过表达ZDHHC20检测YBX1的棕榈酰化修饰水平，并用Western blot实验检测2-BP和放线菌酮处理后YBX1蛋白的稳定性，CCK-8和Transwell法检测YBX1对CRC细胞增殖和迁移的影响，LC-MS法检测YBX1对CRC细胞中m5C修饰水平的影响。结果:ZDHHC20 mRNA和蛋白在CRC组织和细胞中高表达(P<0.05),且ZDHHC20的表达与年龄、肿瘤分期和淋巴结转移相关(P<0.05)。过表达ZDHHC20可促进CRC细胞增殖和侵袭(P<0.05)。ZDHHC20与YBX1表达水平正相关(P<0.05),且YBX1上存在多个潜在棕榈酰化修饰位点。YBX1是棕榈酰化修饰蛋白，ZDHHC20可提高YBX1蛋白棕榈酰化修饰水平及YBX1蛋白稳定性(P<0.05)。YBX1可促进CRC细胞增殖和侵袭，并提高CRC细胞的m5C修饰水平(P<0.05)。结论:ZDHHC20可通过棕榈酰化修饰增强YBX1蛋白稳定性，提高mRNA m5C修饰水平并促进CRC细胞增殖和侵袭。

关键词

结直肠癌 / 5-甲基胞嘧啶 / Y-框结合蛋白1 / 棕榈酰基转移酶20 / 增殖 / 侵袭

基金资助

四川省医学青年创新项目(Q22049); 四川省南充市市级科技研发计划项目(23JCYJP0066,23JCYJP0064); 川北医学院校级项目(CBY23-QNA07)