肿瘤源性LINC01006经外泌体途径促进前列腺癌增殖侵袭

摘要

目的:明确LINC01006在去势抵抗性前列腺癌中的差异性表达，证明LINC01006介导前列腺癌细胞增殖侵袭性增强。探讨LINC01006包装至外泌体并在细胞间传递，使PCa细胞增殖侵袭性增强。方法:分析正常前列腺组织和前列腺癌组织外泌体差异表达的转录组，并进行筛选。验证LINC01006在正常前列腺组织和癌组织中的表达差异。利用构建shRNA表达载体质粒，并结合慢病毒包被技术，通过转染LNCaP及22RV1细胞。验证LINC01006被被膜结构覆盖。高超速离心法提取PCa细胞外泌体并以Western blot验证。RT-qPCR技术验证LINC01006在外泌体中的表达差异。CCK-8增殖活性实验及平板克隆实验来进行验证LINC01006敲除的情况下，PCa细胞增殖、迁移能力的变化情况。CCK-8增殖活性实验及平板克隆实验同种、异种PCa细胞来源的外泌体共培养时，LINC01006敲除的情况下PCa细胞增殖、迁移能力恢复情况。结果:相比较正常前列腺上皮细胞(RWPE-1),LNCaP和22RV1细胞中的LINC01006的表达上调。敲减的LNCaP与对照组相比，LINC01006的表达下调了84.7%(P<0.01),敲减的22RV1与对照组相比，LINC01006的表达下调了80.3%(P<0.01)。CM+RNase+T组相比另外两组，LINC01006的检测水平显著降低(P<0.01)。高超速离心法成功提取外泌体，特异性蛋白CD63,CD81,HSP70高表达(P<0.05)。源于LNCaP细胞和源于22RV1细胞的外泌体LINC01006的表达水平均显著升高(P<0.01)。与对照组(siCtrl)相比，敲除组(si1006)细胞在第3、4天的吸光度显著低于对照组(P<0.01)。与对照组(siCtrl)相比，敲除组的细胞克隆形成数显著减少(P<0.05)。与对照组(Ctrl)相比，外泌体组(LNCaP exosome)细胞在第4天的吸光度显著高于对照组(P<0.05)。与对照组(Ctrl)相比，外泌体组的细胞克隆形成数显著增多(P<0.05)。与对照组(Ctrl)相比，外泌体组(22RV1 exosome)细胞在第3、4天的吸光度显著高于对照组(P<0.05)。与对照组(Ctrl)相比，外泌体组的细胞克隆形成数显著增多(P<0.01)。结论:LINC01006在PCa细胞系中高表达，且能够促进肿瘤的增殖迁移。LINC01006由外泌体包被，经由PCa细胞分泌至胞外发挥相应的生物学活性。PCa源性的外泌体可以诱导LINC01006 PCa细胞恢复增殖能力。

关键词

前列腺癌 / 长链非编码RNA / 外泌体 / 细胞增殖

基金资助

国家自然科学基金(82371634)