NETs在促进肺泡Ⅱ型上皮细胞分泌炎性介质中的作用

摘要

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在促进肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECII)分泌炎性介质中的作用。方法:选取出生7 d的30只SD大鼠为研究对象，抽取心脏血液，提取中性粒细胞，按处理方法的不同分成对照组(Control组)、LPS组及LPS+DNase组，使用免疫荧光法检测各组中性粒细胞体外生成NETs情况。对NETs与AECII进行共培养，按细胞悬液孵育方法的不同分为对照组(Control组)、NETs组及NETs+DNase组，使用流式细胞术检测AECII凋亡情况；使用荧光酶标仪检测各组共培养上清液中NETs游离脱氧核糖核酸(cf-DNA)水平；使用ELISA试剂盒测定各组共培养上清液中白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度，并使用Pearson相关性分析评价cf-DNA与IL-6、IL-8、TNF-α间的相关性。结果:经免疫荧光检测，LPS组与LPS+DNase组NE中均发现小鼠瓜氨酸组蛋白H3(CitH3)与髓过氧化物酶(MPO),LPS组与LPS+DNase组CitH3、MPO水平均高于Control组(P<0.05),LPS+DNase组CitH3、MPO较LPS组更低(P<0.05)。与NE、NETs共培养后AECII凋亡情况，三组早期凋亡与晚期凋亡比例无统计学差异(P>0.05)。NETs组与NETs+DNase组的细胞共培养上清液中cf-DNA、IL-6、IL-8、TNF-α水平均高于Control组(P<0.05);且NETs+DNase组低于NETs组(P<0.05)。细胞培养上清液中cf-DNA水平与IL-6、IL-8、TNF-α水平正相关(r=0.432、0.387、0.326,P<0.05)。结论:AECII与中性粒细胞共培养上清液中存在NETs, NETs可促进AECII分泌IL-6、IL-8、TNF-α等炎性介质，且NETs生成越多，IL-6、IL-8、TNF-α等炎性介质分泌越多。

关键词

中性粒细胞胞外诱捕网 / 肺泡Ⅱ型上皮细胞 / 细胞凋亡 / 炎性介质

基金资助

江苏省妇幼健康重点人才项目(FRC201735)