FBXO28调控HIF-1α表达水平及其对下游氧化应激相关指标影响在肝癌侵袭的作用机制

摘要

目的:探讨F-box蛋白家族成员28(FBXO28)通过调控缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及下游氧化应激相关基因的表达影响肝癌侵袭的作用与机制。方法:培养肝细胞系THLE-2和肝细胞癌细胞系MHCC-LM3。采用MHCC-LM3构建FBXO28过表达组(oe-FBXO28组)、FBXO28敲低组(si-FBXO28组)及相应对照组(NC-oe组、NC-si组)。通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证转染效率。利用CCK-8和EdU染色实验检测细胞的增殖活性；采用流式细胞术分析凋亡与周期；采用Transwell评估迁移和侵袭能力；采用Western blot检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路及HIF-1α、Kelch样ECH关联蛋白1(KEAP1)、NAD(P)H醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽过氧化物酶2(GPX2)蛋白的表达。在裸鼠皮下分别注射oe-FBXO28组、si-FBXO28组、NC-oe组、NC-si组的MHCC-LM3细胞建立荷瘤小鼠模型，观察各组小鼠体内肿瘤的生长。利用苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤组织的病理学改变。并利用免疫组织化学法检测肿瘤组织中HIF-1α、KEAP1、PI3K的表达情况。结果:与THLE-2相比，MHCC-LM3中FBXO28的mRNA表达显著下调(P<0.05)。与NC-oe组比，oe-FBXO28组的细胞增殖活性、迁移/侵袭细胞数、N-cadherin、Vimentin、p-PI3K、p-AKT、HIF-1α及氧化应激标志物(KEAP1、NQO1、GPX2)水平均显著下降(P<0.05),细胞凋亡率和E-cadherin的表达均显著上升(P<0.05),si-FBXO28组的上述指标均呈现相反趋势(P<0.05)。此外，oe-FBXO28组荷瘤小鼠的肿瘤体积及质量均减少(P<0.05),HIF-1α、KEAP1、PI3K的表达均下调(P<0.05);si-FBXO28组的上述指标均呈现相反趋势(P<0.05)。结论:FBXO28通过抑制HIF-1α及氧化应激反应，下调EMT进程，进而抑制肝癌细胞侵袭，为肝癌治疗提供潜在靶点。

关键词

F-box蛋白家族成员28 / 缺氧诱导因子1α / 氧化应激 / 肝细胞癌 / 侵袭

基金资助

广东省广州市科技计划项目(2022-01-02-05-0047)