非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用

刘佳晨; 郭子强; 陈金霞; 曹云雷; 童武; 乔思娜; 刘长龙; 赵冉; 郑海红; 童光志; 李丽薇; 高飞

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.01.01

中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (01) : 1 -6. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.01.01

非洲猪瘟病毒CP312R基因编码蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备与应用

刘佳晨, 郭子强, 陈金霞, 曹云雷, 童武, 乔思娜, 刘长龙, 赵冉, 郑海红, 童光志, 李丽薇, 高飞

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摘要

为制备ASFV CP312R基因编码蛋白的多克隆抗体，利用PCR方法从非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)的灭活样品中扩增出924 bp的CP312R基因全长序列，利用同源重组法构建出原核表达质粒pCold-Ⅰ-ASFV-CP312R,将其转化至原核表达感受态细胞BL21中，经1 mmol/L的IPTG低温条件下诱导表达CP312R编码蛋白并经过镍柱亲和层析纯化后，利用SDS-PAGE对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析，表达蛋白的相对分子质量约为34 kDa,通过Western blot分析，该蛋白能被ASFV抗体特异性识别。将所得的蛋白经处理纯化后免疫小鼠3次，得到含多克隆抗体的血清。利用该抗体检测实验室构建并拯救的表达ASFV CP312R基因编码蛋白的重组猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV),结果显示该多抗具有良好的反应原性和特异性，并且证明了ASFV CP312R基因编码蛋白可在PRRSV活载体中稳定表达。