猪丁型冠状病毒ns7、ns7a蛋白原核表达及多克隆抗体的制备

摘要

为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体，以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究，本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达。利用GST-Resin进行蛋白纯化，将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠，成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体，并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定。结果显示，本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白，制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409 600和1∶12 800,并在Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性。结果表明，制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具。

关键词

猪丁型冠状病毒 / 辅助蛋白ns7和ns7a / 原核表达 / 多克隆抗体