禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

周珈羽; 朱春华; 陈珍; 程龙飞; 陈翠腾; 傅光华; 万春和; 施少华; 梁齐章; 陈红梅; 傅秋玲; 刘荣昌; 黄小红; 黄瑜

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.01.10

中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (01) : 66 -73. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.01.10

禽腺病毒DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

周珈羽, 朱春华, 陈珍, 程龙飞, 陈翠腾, 傅光华, 万春和, 施少华, 梁齐章, 陈红梅, 傅秋玲, 刘荣昌, 黄小红, 黄瑜

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摘要

禽腺病毒属成员鸭腺病毒3型(duck adenovirus type 3,DAdV-3)和禽腺病毒4型(fowl adenovirus serotype-4,FAdV-4)是养殖场主要流行的病原，对养禽业造成巨大的经济损失。目前尚未见可同时快速检测这2种病原的双重荧光定量PCR检测方法，本研究基于DAdV-3 GDMM10毒株和FAdV-4 GDMZ毒株Fiber2基因序列比对及遗传进化分析，分别在Fiber2基因保守区设计特异性引物，建立了能同时鉴别临床上常见的DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR检测方法。结果表明，DAdV-3 GDMM10和FAdV-4 GDMZ Fiber2基因处于两个不同进化分支上，同源性为46.10%。建立的检测DAdV-3和FAdV-4双重荧光定量PCR方法特异性强、灵敏度高，最低可检出45拷贝/μL的DAdV-3样品和17拷贝/μL的FAdV-4样品；且检测结果可直接通过Tm值差异进行判定，简化操作时间。利用该双重荧光定量PCR方法对2022年度临床上采集的34份肝炎-心包积液疑似样品进行检测，DAdV-3和FAdV-4检出率分别为17.65%和2.94%。为进一步开展禽源DAdV-3和FAdV-4的分子流行病学及共感染致病机制奠定了基础。