滑液支原体烯醇化酶在感染宿主中的反应原性和细胞黏附性

摘要

滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)是一种重要的禽病病原，严重危害我国养禽业。本研究旨在分析MS烯醇化酶(enolase, Eno)参与病原致病和诱导感染宿主免疫相关的功能。对MS的Eno蛋白进行种内和种间同源性和进化树分析，并预测Eno的蛋白结合位点和B细胞表位。MS Eno在不同MS菌株间同源性较高，且有别于其他物种。B细胞表位广泛分布在Eno蛋白的各个部分，且大都与预测的蛋白结合位点有重合。进行Eno原核表达和纯化，制备兔抗Eno多克隆抗血清。利用Western blot分析Eno在MS感染鸡或灭活苗免疫鸡中的反应原性。结果显示，MS Eno与兔抗Eno多克隆抗血清、兔抗MS多克隆抗血清、灭活疫苗(HN01株或YBF-MS1株)高免鸡血清、HN01强毒攻毒后阳性鸡血清、3个不同地方来源的临床阳性鸡血清均能发生反应，说明其在疫苗免疫和病原感染鸡中均表现有反应原性。利用菌落印迹和双荧光检测分析并证实Eno为外膜蛋白。利用间接免疫荧光和ELISA板结合试验分析Eno对鸡滑膜鞘细胞(synovial sheath cells, SSCs)是否具有黏附素作用。试验证实Eno对SSCs具有黏附作用，且此黏附作用具有Eno浓度依赖性。以上证明MS Eno在病原感染和灭活苗免疫鸡中具有反应原性，并作为外膜锚定的细胞黏附素参与对关键宿主细胞SSCs的黏附，为后续深入研究Eno的致病和免疫相关功能提供了重要参考。

关键词

滑液支原体 / 烯醇化酶 / 反应原性 / 细胞黏附