过表达Fad24对猪DFAT细胞在Dex成脂诱导条件下对胞内受体及辅助分子表达的影响

摘要

旨在探讨过表达Fad24对猪去分化脂肪细胞(DFAT)在成脂诱导条件下对胞内地塞米松(Dex)受体GR及其高亲和性辅助分子Hsp90和FKBPs表达的影响。用过表达载体pcDNA-Fad24和空载体pcDNA瞬时转染猪DFAT细胞，并在高浓度Dex(1μmol/L)成脂诱导液中诱导成脂分化，然后根据形态学观察检测诱导分化情况，用Real-time PCR和Western blot技术检测对GR及Hsp90和FKBPs表达的影响。结果显示，pcDNA空载体组在诱导5 d时可诱导出成脂细胞，而pcDNA-Fad24过表达组完全抑制成脂分化，细胞积聚形成多个小结节，诱导7 d后形成典型的成骨样结节，茜素红染色证实结节表面有矿化物质沉积。Real-time PCR检测证实，过表达组GRα mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01),而GRβ mRNA的表达量在成脂诱导12 h显著上调(P<0.01);GR的高亲和性辅助分子Hsp90 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01);FKBP 51 mRNA的表达量在成脂诱导24 h显著上调(P<0.01),而FKBP 52 mRNA的表达量在成脂诱导48 h显著上调(P<0.01)。Western blot检测证实，上述各因子的蛋白质表达谱与mRNA表达谱基本一致。过表达Fad24对猪DFAT细胞由成脂分化向成骨分化转化作用，与成脂诱导48 h时调控GRα及其Hsp90和FKBP 52表达的上调，以及GRβ和FKBP 51表达下调相关。

关键词

Fad24 / 猪DFAT细胞 / 成脂诱导 / GR受体 / 高亲和性辅助分子