血清Ⅲ型马立克病病毒单克隆抗体的制备及在疫苗蚀斑计数中的应用

李文超; 刘丹; 杨承槐; 李启红; 李欣; 张莹; 毛娅卿; 李俊平

doi:10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.02.06

中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (02) : 258 -263. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.02.06

血清Ⅲ型马立克病病毒单克隆抗体的制备及在疫苗蚀斑计数中的应用

李文超, 刘丹, 杨承槐, 李启红, 李欣, 张莹, 毛娅卿, 李俊平

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摘要

通过制备马立克病病毒(Marek's disease virus, MDV)血清Ⅲ型特异性单克隆抗体，并对其特性进行鉴定，为建立鸡马立克病(Marek's disease, MD)二价活疫苗间接免疫荧光蚀斑计数方法奠定基础。以纯化的MDV血清Ⅲ型HVT Fc-126株免疫BALB/c小鼠，采用常规单克隆抗体技术，经间接免疫荧光方法筛选杂交瘤细胞株；选取1株制备MDVⅢ型单克隆抗体，建立MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法。结果筛选出2株稳定分泌抗MDV血清Ⅲ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并选择1D2株单抗建立了检测MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法，可快速准确地计数二价活疫苗中血清Ⅲ型病毒的蚀斑形成单位数(Plaque forming unit, PFU),与琼脂覆盖法相比，敏感性和特异性大大提高。因此，制备的MDV单克隆抗体具有良好的血清型特异性，可用于MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数。