基于E2蛋白BVDV腺病毒载体疫苗的制备及对小鼠的免疫原性分析

摘要

选用牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV) SWU-Z6株的E2基因序列为模板，针对HEK293细胞密码子偏嗜性优化合成全长E2基因，利用AdMax腺病毒包装系统制备Ad5-BVDV-E2。采用PCR、间接免疫荧光(IFA)和Western blot验证了E2蛋白在HEK293细胞中成功表达，并通过肌注、滴鼻和口服免疫途径来免疫小鼠，同时设立BVDV商业灭活苗组和PBS空白对照组。结果显示，经酶切鉴定和测序验证表明，优化后的E2基因已正确克隆至腺病毒穿梭载体pDC316中，并获得重组质粒pDC316-E2,将pDC316-E2和腺病毒骨架质粒共转染至HEK293细胞，获得重组腺病毒Ad5-BVDV-E2。PCR验证了E2基因成功插入到腺病毒载体基因组中，IFA和Western blot证实了重组腺病毒能够正确表达E2蛋白，并具有良好的生物学活性。通过肌注、滴鼻和口服均能产生较高的抗体水平，其中Ad5-BVDV-E2肌注组小鼠加强免疫1周后抗体滴度最高达到1∶102 400。结果表明，成功制备了Ad5-BVDV-E2,能诱导机体产生较强的体液免疫反应，表明Ad5-BVDV-E2具有临床应用的潜力。

关键词

牛病毒性腹泻病毒 / E2蛋白 / 重组腺病毒载体疫苗 / 免疫原性